买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：华中科技大学

摘要：本发明提供了EGF储备水凝胶体外培养乳腺癌类器官的构建方法，属于动物微细胞生物技术领域。所述EGF储备水凝胶体外培养乳腺癌类器官的构建方法，包括以下步骤：S1、海藻酸钠冻干水凝胶的制备；S2、海藻酸钠‑Ca2+冻干水凝胶的制备；S3、EGF储备水凝胶的制备；S4、类器官培养体系的构建。本发明为深入研究乳腺癌类器官生物学特性、药物筛选及个性化治疗策略开发提供了更为精准、可靠的体外模型。

主权项：1.EGF储备水凝胶体外培养乳腺癌类器官的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、海藻酸钠冻干水凝胶的制备：S101、称取海藻酸钠粉末，配制浓度为2wv%~4wv%海藻酸钠溶液；S102、将步骤S101制得的海藻酸钠凝胶以800μL体积加入到预冷处理后的24孔板中，将所述24孔板进行冷冻冻干处理，制得海藻酸钠冻干凝胶；S2、海藻酸钠-Ca2+冻干水凝胶的制备：S201、将步骤S102中制得的海藻酸钠冻干凝胶浸没于预先配制好浓度为2wv%的CaCl2溶液中，进行交联反应1h；S202、步骤S201交联反应结束后，取出交联后的水凝胶并置于无菌蒸馏水中洗涤3~5次以去除未反应的CaCl2；S203、除去洗涤液后将步骤S202得到的水凝胶进行消毒处理，消毒后，用无菌蒸馏水洗涤3~5次，制得海藻酸钠-Ca2+冻干水凝胶；S3、EGF储备水凝胶的制备：S301、将步骤S203中制得的海藻酸钠-Ca2+冻干水凝胶重置于预冷的24孔板中进冷冻冻干处理，确保水分完全去除；S302、对步骤S301中海藻酸钠-Ca2+冻干水凝胶进行灭菌处理；S303、使用无菌操作技术，用无菌PBS或细胞培养基将高浓度的EGF溶液进行稀释；S304、在无菌条件下，将步骤S303中稀释后的EGF溶液以200μL孔的量滴加到步骤S203中的含有海藻酸钠-Ca2+冻干水凝胶的孔板中，轻轻晃动孔板，确保EGF溶液均匀分布；S305、将步骤S304中添加了EGF溶液的孔板置于4℃环境中静置孵育1h，使EGF溶液充分渗透并被海藻酸钠-Ca2+冻干水凝胶吸收，然后将所述水凝胶进行冷冻冻干处理，制得EGF储备水凝胶；S4、类器官培养体系的构建：S401、将乳腺癌组织提取的单细胞加入含10%胎牛血清和5%青霉素-链霉素的DMEM培养基中，制成单细胞悬液；S402、将100μL步骤S401中的单细胞悬液加入步骤S305制得的EGF储备水凝胶中，静置30min使单细胞悬液被EGF储备水凝胶吸收完全；S403、补充500~800mL完全培养基浸没步骤S402中的水凝胶，将所述水凝胶放入37℃、含5%CO2的细胞培养箱中培养3~7d，得到乳腺癌类器官。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中科技大学 EGF储备水凝胶体外培养乳腺癌类器官的构建方法