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申请/专利权人：洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司

摘要：本发明涉及一种蛋白核小球藻蛋白的制备工艺，在BG11培养基中加水、灭菌后接种蛋白核小球藻藻种，培养后获得种子液，将种子液接种到含有葡萄糖的BG11培养基中培养，得二级种子液，将二级种子液接种到发酵培养基中，适宜温度下发酵培养，并流加20％氨水控制培养液pH，得到蛋白核小球藻藻液，藻液过筛后烘干得到藻粉；藻粉溶于水，加入氢氧化钠和中性蛋白酶，经水浴处理后进行超声细胞破碎，离心后，取上清液，上清液进一步制得粗蛋白，之后进行纯化处理，获得纯化蛋白。本发明采用超声辅助提取蛋白核小球藻蛋白，蛋白溶出率大幅度提高，且制备的蛋白核小球藻蛋白的溶解度、持水性、表面疏水性、乳化性和乳化稳定性都显著提升。

主权项：1.一种蛋白核小球藻蛋白的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：1制备种子液：称取一定量BG11培养基，加入蒸馏水溶解，于121℃高压灭菌后，向其中接种纯化后的蛋白核小球藻藻种，所得混合液置于恒温培养摇床培养，培养温度25～30℃，摇床转速90～150rmin，培养时间5d，得到种子液；2制备二级种子液：称取一定量BG11培养基和一定量葡萄糖，两者混合在一起，加入适量蒸馏水溶解，得到溶液A，将溶液A的pH值调节至6～7，于121℃高压灭菌后冷却至室温，向其中接入步骤1制备的种子液，然后置于恒温培养摇床培养，培养温度25～30℃，摇床转速90～150rmin，培养时间5～7d，得到二级种子液；3制备蛋白核小球藻藻液：称取一定量BG11培养基和一定量葡萄糖，将两者混合在一起，加入适量蒸馏水溶解，得到溶液B，将溶液B的pH值调节至6～7，于121℃高压灭菌后冷却至室温，得到发酵培养基，将发酵培养基加入全自动机械搅拌玻璃发酵罐中，再将培养好的二级种子液按照体积百分数为10％的接种量接种于所述玻璃发酵罐中培养，培养温度28～30℃，搅拌速度100～200rmin，培养过程中流加质量分数为20％氨水控制培养液pH为6.8±0.2，发酵时间2d，得到蛋白核小球藻藻液；4制备藻粉：将步骤3得到的蛋白核小球藻藻液用80～100目滤网过滤，收集沉淀并平铺于80℃烘箱中，烘干，得藻粉；5制备蛋白液：取一定量步骤4制备的藻粉，向其中添加蒸馏水，并加入适量NaOH溶液，得到的混合体系在室温静置4h，然后用1molL盐酸调节混合体系的pH为6.8，再向混合体系中加入中性蛋白酶，于30～65℃水浴20～60min，随后进行超声细胞破碎，之后调节细胞破碎液的pH为10.0并在此条件下保持10min，将酶灭活，将细胞破碎液离心后取上清液；6制备粗蛋白：利用质量分数为10％～30％的盐酸将步骤5得到的上清液的pH调至3.9～4.1，静置20min后离心，所得沉淀冷冻干燥，得到粗蛋白；7制备纯化蛋白：将步骤6得到的粗蛋白溶于水中，制备浓度为10mgmL的蛋白液，上样至DEAE-52纤维素层析柱并进行梯度洗脱，洗脱液合并后放入MD558000-14000D透析袋中用PEG20000进行浓缩，然后冷冻干燥，得到纯化蛋白核小球藻蛋白。

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