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申请/专利权人：北京康润诚业生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种宿主蛋白残留检测试剂盒及其制备方法，涉及宿主蛋白残留检测试剂盒制备技术领域。本发明为解决ELISA中存在的非特异性吸附问题，从链霉亲和素入手，将传统的通过辣根过氢化物酶标记的链霉亲和素，通过聚乙二醇与改性后的聚乳酸纳米微球进行桥接，使其形成具备可阻止特异性吸附的纳米微球，从而提高其灵敏性。

主权项：1.一种宿主蛋白残留检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有抗HCP蛋白抗体的酶标板、生物素标记的抗体、链霉亲和素改性纳米颗粒和辅助制剂；所述链霉亲和素改性纳米颗粒包括以下制备步骤：S1、将聚乳酸加入至聚乳酸质量65~70倍的二氯甲烷中，搅拌均匀，制备成聚乳酸溶液备用；将明胶加入至明胶质量330~340倍的去离子水中，搅拌均匀，制备成明胶溶液备用；在温度为25~35℃，转速为1800rmp条件下，于0.8~1h内将聚乳酸溶液滴加入至明胶水溶液中，滴加完毕后继续搅拌24~28h，搅拌完毕后采用0.2~0.25μm的过滤膜进行过滤，将过滤产物经冷冻干燥制备成聚乳酸纳米微球；将1，3-二（氨基丙基）四甲基二硅氧烷加入至1，3-二（氨基丙基）四甲基二硅氧烷质量10~12倍的二甲基亚砜中，搅拌均匀，制备成1，3-二（氨基丙基）四甲基二硅氧烷溶液备用；将聚乳酸纳米微球加入至聚乳酸纳米微球质量35~40倍的二氯甲烷中，超声分散10~15min，超声分散完毕后，在氮气保护、温度为30~40℃条件下，加入聚乳酸纳米微球质量6~8倍的五氯化磷，搅拌均匀并回流反应1~1.5h，回流反应完毕后通过常压蒸馏除去二氯甲烷，并升温至45~55℃，之后加入聚乳酸纳米微球质量4~5倍的二甲基亚砜，并在1~1.2h内匀速滴加1，3-二（氨基丙基）四甲基二硅氧烷溶液，滴加完毕后反应7~9h，反应完毕后加入聚乳酸纳米微球质量240~250倍的去离子水，搅拌过滤后，将过滤产物用去离子水洗涤2~3次后，冷冻干燥制备成改性聚乳酸纳米微球；将活性酯-聚乙二醇-活性酯和甲氧基-聚乙二醇-活性酯按照质量比1：1.2~1.5，进行混合搅拌均匀，制备成混合溶液备用；将改性聚乳酸纳米微球加入至改性聚乳酸纳米微球质量4~4.5倍的混合溶液中，搅拌均匀，并加入改性聚乳酸纳米微球质量0.01~0.05倍的三乙胺，搅拌均匀，静置反应20~25min后，过滤并将过滤产物用N，N-二甲基甲酰胺和无水乙醇分别洗涤2~3次后，再用离子水洗涤，制备成改性纳米颗粒；S2、将改性纳米颗粒加入至改性纳米颗粒质量6~8倍的MES缓冲溶液中，加入改性纳米颗粒质量0.05~0.08倍的链霉亲和素，并在温度为0~5℃条件下，摇床孵育2~3h，用MES溶液离心洗涤2~3次后，制得链霉亲和素改性纳米颗粒。

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