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摘要：本发明属于临床检验领域，涉及一种检测贫血标志物的试剂盒及其制备方法和应用。一种检测贫血标志物的方法，分别向所述系列校准样本液、所述系列质控样本液和血清样本中分别加入内标样本使用液，混匀，再继续加入样本萃取液，混匀，离心后取上清液，上清进行LC‑MSMS检测。现有技术中水溶性维生素检测方法、叶酸检测方法、甲基丙二酸检测方法等均无法实现同型半胱氨酸、活性叶酸、维生素B12、甲基丙二酸和维生素C同时检测，本发明针对该技术问题，发明了一种同时检测上述贫血标志物的检测方法。

主权项：1.一种检测贫血标志物的试剂盒，其特征在于，所述贫血标志物为同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸；所述的试剂盒包含如下试剂：1系列校准品：所述系列校准品为具有五个不同浓度水平的系列校准品工作液的冻干物，所述系列校准品工作液为已知浓度的标准品工作液用第二溶剂稀释而成的具有五个不同浓度水平的校准品工作液；其中，所述校准品工作液的五个浓度水平为：校准品S1工作液中同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸分别为700ngmL、1.0ngmL、20ngmL、0.05ngmL、400ngmL；校准品S2工作液中同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸分别为1400ngmL、2.0ngmL、40ngmL、0.1ngmL、800ngmL；校准品S3工作液中同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸分别为7000ngmL、10ngmL、200ngmL、0.5ngmL、4000ngmL；校准品S4工作液中同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸分别为28000ngmL、40ngmL、800ngmL、2.0ngmL、16000ngmL；校准品S5工作液中同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸分别为56000ngmL、80ngmL、1600ngmL、4.0ngmL、32000ngmL；2系列质控品：所述系列质控品为具有两个不同浓度水平的系列质控品工作液的冻干物，所述的系列质控品工作液为已知浓度的标准品工作液用第二溶剂稀释而成的具有两个不同浓度水平的质控品工作液；其中，所述质控品工作液的两个浓度水平为：质控品QC1工作液中同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸分别为3500ngmL、5.0ngmL、100ngmL、0.25ngmL、2000ngmL；质控品QC2工作液中同型半胱氨酸、5-甲基四氢叶酸、甲基丙二酸、氰钴胺和抗坏血酸分别为35000ngmL、50ngmL、1000ngmL、2.5ngmL、20000ngmL；3内标品：所述内标品为内标品工作液的冻干物；所述内标品工作液中同型半胱氨酸-d4、5-甲基四氢叶酸-d3、甲基丙二酸-d3、抗坏血酸-13C6的浓度分别为7000ngmL、10ngmL、200ngmL、4000ngmL；4保护剂：所述保护剂为保护剂工作液的冻干物；所述保护剂工作液为二硫苏糖醇水溶液，溶液中二硫苏糖醇的浓度为5gL；5样本萃取液：含有偏磷酸和磺基水杨酸的水溶液，溶液中偏磷酸和磺基水杨酸的浓度均为50gL；6流动相添加剂：含有50％甲酸和0.2molL乙酸铵的水溶液；所述校准品、所述质控品、所述内标品、所述保护剂的冻干工艺依次顺序包括预冻阶段、升华干燥和解析干燥；所述的预冻阶段的操作条件如下： 所述的升华干燥的操作条件如下： 所述的解析干燥的操作条件如下： 或者，所述校准品、所述质控品、所述内标品、所述保护剂的冻干工艺依次顺序包括预冻阶段、升华干燥和解析干燥；所述的预冻阶段的操作条件如下： 所述的升华干燥的操作条件如下： 所述的解析干燥的操作条件如下：

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