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摘要:本发明公开了一种利用hESCs诱导分化的脑类器官建立压力应激模型的方法,包括将人胚胎干细胞hESCs于培养基中培养,再接种到U型底96孔超低附着力培养板中培养,在培养基中加入Y‑27632,然后移至胚状体EBs形成培养基中培养,5天后,将EBs转移到含有诱导培养基的24孔超低附着力培养板中培养,用基质胶包裹EBs,并转移到基质胶预处理的6孔板中进行类器官培养,形成基质胶包埋的脑类器官,转移到成熟培养基中,并置于57‑95rpm的摇床上培养,获得脑类器官,再在培养基中加入1‑3‑氯苯基哌嗪盐酸盐诱导脑类器官应激造模,通过48小时,24002gmL的方案完成压力应激模型的构建。本发明的压力应激模型可用于研究人源化的应激相关神经精神疾病的发病机制和药物筛选。
主权项:1.一种利用hESCs诱导分化的脑类器官建立压力应激模型的方法,包括以下步骤:1将人胚胎干细胞hESCs于mTeSR1培养基中培养,并以每孔9000个细胞的密度接种到U型底96孔超低附着力培养板中,在培养基中加入Y-27632;2将培养的hESCs移至胚状体EBs形成培养基中培养,5天后,将EBs转移到含有诱导培养基的24孔超低附着力培养板中培养;3培养2天后,用基质胶包裹EBs,并转移到预处理的6孔板中进行类器官培养,形成基质胶包埋的脑类器官;4将包埋的脑类器官在扩展培养基中维持3天,将类器官转移到成熟培养基中,并置于57-95rpm的摇床上培养,获得脑类器官;5在脑类器官培养基中加入1-3-氯苯基哌嗪盐酸盐mCPP诱导应激,完成压力应激模型的构建。
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