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摘要：本发明涉及肉鸡养殖技术领域，且公开了一种基于副鸡禽杆菌的荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：通过NCBIGenBank数据库中下载recN基因的全序列，选择保守区域用Primier5软件设计特异性引物，并通过NCBIBlast验证其特异性；取‑80℃冰箱冻存的副鸡禽杆菌甘油菌，得到菌液，然后对菌液进行培养振荡得到待提取菌液；使用试剂盒提取待提取菌液中副鸡禽杆菌基因组DNA，得到副鸡禽杆菌DNA。本发明相较于细菌培养和血清学检测等传统方法具有更高的灵敏度、特异性、准确性和重复性，选择recN基因作为靶标确保了各种血清型的副鸡禽杆菌都能够被检测到，确保了检测结果的准确性。
主权项：1.一种基于副鸡禽杆菌的荧光定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：通过NCBIGenBank数据库中下载recN基因的全序列，选择保守区域用Primier5软件设计特异性引物，并通过NCBIBlast验证其特异性；取-80℃冰箱冻存的副鸡禽杆菌甘油菌，得到菌液，然后对菌液进行培养振荡得到待提取菌液；使用试剂盒提取待提取菌液中副鸡禽杆菌基因组DNA，得到副鸡禽杆菌DNA；以副鸡禽杆菌DNA为模板，通过特异性引物对其进行PCR反应，扩增副鸡禽杆菌DNA基因，得到扩增DNA，将扩增DNA经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定条带大小正确后，在紫外灯下切取含有目的条带的琼脂糖凝胶块放入1.5mL的离心管中，并回收得到目的片段；将目的片段5μL与1μL10×loadingbuffer混合，经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定条带大小正确后，与pMD18-T克隆载体连接，16℃反应30min，得到连接体，然后对连接体进行转化操作，得到单菌落；通过PCR反应鉴定单菌落是否含有重组质粒，并得到扩增产物，并对扩增产物进行测序，然后对测序正确的扩增产物进行质粒提取，得到正确的重组质粒；使用微量核酸浓度测定仪测定重组质粒标准品的浓度，并根据拷贝公式计算其拷贝数，并通过拷贝数绘制标准曲线，并对其进行试验验证。
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