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摘要:本发明公开了一种以葡萄种子为受体材料的农杆菌介导遗传转化方法,属于植物基因工程技术领域。该方法包括以下步骤:S1、葡萄种子经预处理后,培养至种皮开裂;S2、采用农杆菌侵染法将种皮开裂的葡萄种子侵染,得到侵染后的葡萄种子;S3、侵染后的葡萄种子培养后,筛选得到农杆菌转化植株。本发明方法中再生植株的发生途径绕开了由外植体脱分化形成、愈伤组织再分化形成体胚的漫长步骤,且受体统一、充足,只需4个月就可生长为完整葡萄小苗,相较于胚性愈伤受体材料的转化周期缩短了2个月,为建立高效葡萄遗传转化体系奠定了强有力的技术支撑。
主权项:1.一种以葡萄种子为受体材料的农杆菌介导遗传转化方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、葡萄种子经预处理后,培养至种皮开裂;S2、采用农杆菌侵染法侵染种皮开裂的葡萄种子,得到侵染后的葡萄种子;S3、培养所述侵染后的葡萄种子,筛选得到农杆菌转化植株;步骤S1中,所述预处理包括将所述葡萄种子浸泡于2.5g·L-1的赤霉素溶液,再进行水浴处理、消毒处理和皮切处理;所述水浴处理的温度为55℃;所述皮切处理为沿所述种子喙部至种脐斜面划破种皮;步骤S2中,所述农杆菌侵染法的步骤包括:将农杆菌活化后培养,得到农杆菌侵染液,将步骤S1中得到的种皮开裂的葡萄种子浸没于所述农杆菌侵染液,然后侵染;所述农杆菌活化过程中,在农杆菌菌液中添加乙酰丁香酮;所述侵染的方式为抽真空或抽真空+超声;所述抽真空的条件为0.8Mpa,时间为3min;所述超声的条件为100W,时间为20s。
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百度查询: 宁夏大学 一种以葡萄种子为受体材料的农杆菌介导遗传转化方法
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