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摘要：本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9的地熊蜂卵的基因编辑方法，属于基因编辑技术领域，包括以下步骤：1针对靶基因，确定并体外合成sgRNA；2收集地熊蜂蜂王3小时内产的卵，显微注射sgRNA和Cas9蛋白的混合物；3放置在恒温培养箱中，在温度28±1℃，湿度50±10％条件下培养3天，检测靶基因是否发生了突变。本发明还公开了一种地熊蜂卵的收集方法，步骤如下：①将单头蜂王置于存放有糖水和花粉球的小白盒中；②在第7天时，在同一时间将卵室及之前产的卵全部去除；③将卵室划开，取出卵；④将卵置于次氯酸钠溶液中浸泡，蒸馏水清洗。本发明的方法有利于地熊蜂基因功能的研究，为改良蜂品系提供了技术支持。
主权项：1.一种基于CRISPR-Cas9的地熊蜂卵的基因编辑方法，其特征在于，包括以下步骤：1针对靶基因，确定并体外合成sgRNA；靶基因为地熊蜂Btyellow，选择该基因合适的候选靶标位点，候选靶标位点的序列为：5’-GGAAGATAATCTTCCCCTTGG-3’；2收集地熊蜂蜂王3小时内产的卵，显微注射sgRNA和Cas9蛋白的混合物；收集地熊蜂蜂王3小时内产的卵的具体方法为：①将刚刚解除滞育的单头蜂王置于存放有糖水和花粉球的小白盒中；②在第7天时，在同一时间将卵室及之前产的卵全部去除；③3小时后，将产卵的蜂王移出小白盒，并用小刀小心的将卵室划开，取出卵；④将取出的卵置于次氯酸钠溶液中，浸泡1min，取出，用蒸馏水清洗2～3次；注射时压强为2000hPa，平衡压为500hPa，注入的时间为0.1s；3注射后的卵放置在恒温培养箱中，在温度28±1℃，湿度50±10％条件下培养3天，检测靶基因是否发生了突变。
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百度查询： 山东省农业科学院 基于CRISPR-Cas9的地熊蜂卵的基因编辑方法
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