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一种外周血游离DNA提取方法 

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摘要:本发明提供了一种外周血游离DNA提取方法,通过对提取过程中使用的试剂的组分进行筛选、调整浓度,优化反应条件等,实现了外周血游离DNA核酸提取效率和质量的大幅提升,降低了提取过程中大片段污染的发生,并且价格低廉,适用于国内环境,易于推广,具有较高的应用价值。

主权项:1.一种外周血游离DNA提取方法,包括:S1.将0.5~4mL的血浆放入装有100μL~150μL蛋白酶K的离心管中,再加入100μL~150μL裂解液1,混匀后在15-60℃反应10-60分钟,得到混合液;S2.向S1得到的混合液中加入4mL~8mL裂解液2和30μL~50μL磁珠,室温下混匀后,反应10-60分钟;离心后转移至磁力架上,吸附磁珠,弃溶液;S3.加入0.5mL~0.8mL洗涤液1,混匀、离心后置于磁力架吸附,弃溶液;S4.加入0.5mL~0.8mL洗涤液2,混匀后,转移至磁力架吸附,弃溶液;S5.离心后,吸尽残液;磁珠在空气中干燥2~5分钟;S6.加入50μL~100μL洗脱液,DNA溶解后转移至磁力架上吸附,将含有cfDNA的上清转移至新的离心管中,得到cfDNA提取产物;裂解液1包含0.05%~1%的十二水合柠檬酸钠和1%~5%的SDS;裂解液2包含10%~20%的异硫氰酸胍,1%~5%的NP40,3%的氯化钾,2%的氯化钠,0.1%~0.3%的磷酸二氢钠,0.5%~1%的三羟甲基氨基甲烷,0.05%~0.2%的酒石酸钠和25%异丙醇。

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