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摘要:本发明公开了一种针对沙滩样本的总DNA提取方法,通过野外采集沙滩样本,无需玻璃珠等裂解介质,利用沙子特性释放沉积物中的DNA;该方法特别适用于沙滩环境生物检测、基因组测序以及宏条形码技术;能够有效去除混合液中的杂质,获得很好的DNA产量和质量,提高了提取效率,降低了提取成本。
主权项:1.一种针对沙滩样本的总DNA提取方法,其特征在于,包括如下步骤:S1.采用5mL容器管采集沙滩样本至4mL;S2.加入1mL抽提缓冲溶液在200rpm的条件下旋转震荡30min;S3.加入200μL裂解液混匀,90℃加热10min,期间颠倒混匀一次;加热结束后静置5min,将液体转移至离心管;S4.加入300μL沉淀液,充分混匀后冰浴5min,再次充分颠倒混匀;S5.14,000×g离心5min,吸取上清液转移至新的离心管,并加入800μL6molL盐酸胍、400μL无水乙醇,混匀后静置3min;S6.将步骤S5所得混合溶液分批次加入吸附柱中,静置30s后10000×g离心1min,弃去滤液,重复本步骤至步骤S5所得混合溶液全部转移至吸附柱中;S7.加入750μL洗脱液至吸附柱中,静置30s后10,000×g离心1min,弃去滤液;S8.加入750μL漂洗液至吸附柱中,静置30s后10,000×g离心1min,弃去滤液;S9.14,000×g离心空的吸附柱3min,弃去离心管;S10.更换新的离心管作为收集管,加入100μLddH2O,55℃静置5min;S11.14,000×g离心2min,回收收集管中的DNA。
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百度查询: 南方海洋科学与工程广东省实验室(广州) 一种针对沙滩样本的总DNA提取方法
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