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用于改进编索引的核酸文库中的样品鉴定的组合物和方法 

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摘要:本发明涉及组合物和方法,所述组合物和方法通过在将保护性衔接子连接至靶多核苷酸后、在扩增和测序之前进行外切核酸酶处理来降解未掺入的衔接子来提高用于多重下一代测序编索引的核酸文库制备物中的正确样品鉴定率。

主权项:1.一种方法,所述方法包括:提供第一多于一个双链靶多核苷酸片段,每一个片段具有第一末端和第二末端;提供包括具有5’末端和3’末端的第一链和具有5’末端和3’末端的第二链的第一衔接子寡核苷酸,其中所述第一衔接子寡核苷酸包含i双链区域,所述双链区域包含所述第一链的5’末端和所述第二链的3’末端,和ii单链区域,在所述单链区域中所述第一链和所述第二链是单链的,其中所述单链区域包含所述第一链的3’末端和所述第二链的5’末端,其中所述第一衔接子寡核苷酸包含第一文库特异性序列,其中所述第一链的3’末端被修饰以防止被具有3’外切核酸酶活性的酶消化,并且其中所述第二链的5’末端被修饰以防止被具有5’外切核酸酶活性的酶消化;将所述第一衔接子寡核苷酸和所述第一多于一个双链靶多核苷酸片段在适于将所述第一衔接子寡核苷酸的第一链的5’末端和所述第一衔接子寡核苷酸的第二链的3’末端连接至所述双链靶多核苷酸片段的第一末端和第二末端的条件下孵育,以产生包含第一衔接子-靶-第一衔接子序列的多核苷酸的第一文库;和将所述第一文库的多核苷酸与外切核酸酶接触,其中所述外切核酸酶包括3’单链外切核酸酶活性和5’单链外切核酸酶活性,以选择性降解未连接至所述双链靶多核苷酸片段的第一衔接子寡核苷酸。

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