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摘要:本发明提出了一种毛囊干细胞诱导分化为神经干细胞的方法,包括取毛囊干细胞接种至完全培养液中,培养1~2天后使用分化培养液A进行诱导培养,诱导培养2~5天后使用分化培养液B进行二次诱导培养,二次诱导培养3~5天后,使用分化培养液C进行三次诱导培养,进行三次诱导培养前,以2~8mT的磁场强度进行磁场处理10~30s后,三次诱导培养4~6天,得目标神经干细胞。本发明设置阶段诱导分化培养的模式,减少了分化培养基组分的用量,同时结合简单方便的外施加低强度磁场的方式,可将毛囊干细胞诱导分化为神经干细胞,诱导时间较短,诱导分化均一,获得的毛囊源神经干细胞活性良好,可有效促进成纤维细胞的增殖活性,能够为组织修复重塑提供一定基础。
主权项:1.一种毛囊干细胞诱导分化为神经干细胞的方法,其特征在于,包括如下步骤:S1原料:取毛囊,消化后加入完全培养液终止消化,离心,再次加入完全培养液重悬细胞,将细胞进行传代培养,得毛囊干细胞;所述完全培养液的组分包括碱性成纤维细胞生长因子20~50ngmL和血清替代物1wt%~4wt%;S2诱导:将毛囊干细胞制成毛囊干细胞悬液,接种至完全培养液中,培养1~2天后使用分化培养液A进行诱导培养,诱导培养2~5天后使用分化培养液B进行二次诱导培养,二次诱导培养3~5天后,使用分化培养液C以2~8mT的磁场强度进行磁场处理10~30s后,进行三次诱导培养,三次诱导培养4~6天,得目标神经干细胞;所述分化培养液A的组分包括表皮细胞生长因子0.1~30ngmL;所述分化培养液B的组分包括表皮细胞生长因子0.1~30ngmL、碱性成纤维细胞生长因子0.1~50ngmL、B27添加剂0.5~5nM和谷氨酰胺0.5~5mM;所述分化培养液C的组分包括表皮细胞生长因子0.1~30ngmL、谷氨酰胺0.5~5mM和西红花苷0.1~5μgmL。
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