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摘要:本发明涉及海参深加工领域,具体涉及一种从海参浓缩的小分子肽复合物及其制备方法。乙二胺四乙酸通过螯合金属离子,破坏蛋白质高级结构,暴露更多肽键,为酶解创造条件。中性蛋白酶和木瓜蛋白酶协同作用,分别切割疏水和碱性中性氨基酸残基间的肽键,提高水解效率。改性介孔二氧化硅利用大表面积和规则孔道提供吸附位点,磷脂双层通过两亲性与小分子肽选择性相互作用,大分子难以进入孔道或与磷脂层强相互作用,实现小分子肽分离,此外孔道系统还固定化酶提高效率。乙二胺四乙酸持续螯合作用防止小分子肽被金属离子催化氧化,保证小分子肽稳定性。
主权项:1.一种从海参浓缩的小分子肽复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S11.预处理:将新鲜海参清洗干净,去除内脏,切碎成1~2cm的小块,得到海参块,将海参块在-40℃冷冻24h,得到冷冻处理后的海参块,将冷冻处理后的海参块置于冷冻干燥机中干燥48h,得到干燥后的海参块,将干燥后的海参块粉碎过60目筛,得到海参粉末;S12.酶解:称取海参粉末,然后按海参粉末与超纯水质量比为1:20~25加入超纯水,得到海参粉溶液,调节pH至6.5~7.0,按照海参粉末与复合酶制剂质量比为1:2.5~3加入复合酶制剂,于50~60℃水浴中酶解4~6h,搅拌转速为200~300rpm,得到第一混合溶液;S13.助剂辅助提取:将第一混合溶液加入到反应容器中,依次加入乙二胺四乙酸和改性介孔二氧化硅,搅拌温度为45~50℃,搅拌速度为200~250rmin,添加磷酸盐缓冲液调节pH为6.5~7.0,静置10~15min,得到第二混合溶液;S14.灭酶:将第二混合溶液升温至95~100℃处理15~20min,得到第三混合溶液;S15.分离纯化:将第三混合溶液于4~10℃,10000~20000rmin离心20~30min,收集上清液,将上清液使用3kDa截留分子量的超滤膜进行超滤,得到超滤液;S16.浓缩与干燥:将超滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至原体积的15~16,得到第一浓缩液,向第一浓缩液中缓慢加入无水乙醇至终浓度70~80%,于4~10℃静置12~24h,得到第二浓缩液,将第二浓缩液于4~10℃、10000~15000rmin离心20~25min,得到沉淀,将沉淀重新溶解于适量超纯水中,冷冻干燥36~48h,得到海参小分子肽复合物粉末;所述改性介孔二氧化硅是仿生磷脂双层修饰介孔二氧化硅,改性介孔二氧化硅表面具有磷脂双分子层。
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