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申请/专利权人：广东海洋大学;广东海洋大学深圳研究院;深圳市万骐海洋生物科技有限公司

摘要：本发明属于医药技术领域，具体公开了雄海马在制备改善抑郁症绝望无助行为药物或制剂中的应用。本发明通过慢性温和不可预知性刺激建立小鼠抑郁症模型，给小鼠饲喂含有雄海马的饲料，通过强迫游泳实验评价雄海马抗抑郁样行为的效果，通过HPLC等分子生物学技术检测其可能的机制。本发明研究发现雄海马通过调控小鼠海马脑区神经递质及其代谢物的变化，恢复小鼠脑内神经递质水平，进而改善CUMS诱导的抑郁绝望行为，为研究开发新的抗抑郁药物提供了新的途径。

主权项：1.雄海马在制备改善抑郁症绝望无助行为药物或制剂中的应用。

全文数据：雄海马在制备改善抑郁症绝望无助行为药物或制剂中的应用[0001]技术领域[0002]本发明涉及医药技术领域，具体地，涉及雄海马在制备改善抑郁症绝望无助行为药物或制剂中的应用。背景技术[0003]海马是我国传统名贵海洋中药材，具有温肾壮阳、消解散肿的作用。常用于阳痿，遗尿，肾虚作喘，癥瘕积聚，跌打损伤;外治痈肿疔疮。对其化学成分的研究表明，海马具有较高的营养和药用价值以及多种化学活性成分:蛋白质含量高达70%以上，还有脂肪酸及脂类成分，留体类化合物，磷脂类成分及多种无机元素等。已有研究表明海马还具有抗氧化、延缓衰老的作用，能调节免疫功能。[0004]海马常应用于保健品的制备中，如中国发明专利公开号CNl478489，公开日2004年3月3日，公开了海马在制备治疗良性前列腺增生的药物及保健食品中的应用，采用海马复合酶解产物制成海马胶囊，经实验证明，海马对前列腺增生疾病具有良好的疗效，可达到阳性对照药保列治的治疗效果，同时具有毒性低的优点。又如中国发明专利公开号CN1858189,公开日2006年11月8日，公开了一种海马酒及其制备方法，该海马酒具有药效高、口感好、配制时间短、配方简单优点，是一种补肾壮阳、明目益智、安神镇静、舒筋活络保健食品。[0005]抑郁症病人表现出各种抑郁样行为变化，包括常见的绝望无助甚至自杀行为。然而目前尚未有关于海马能否改善抑郁症所伴随的绝望无助甚至自杀等行为学表现的相关报道，其作用的分子机理更是不清楚。发明内容[0006]本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供雄海马在制备改善抑郁症绝望无助行为药物或制剂中的应用，本发明发现雄海马通过调控小鼠海马脑区神经递质及其代谢物的变化，恢复小鼠脑内神经递质水平，进而改善CUMS诱导的抑郁绝望行为，因此可用于开发新的抗抑郁药物。[0007]本发明的另一目的在于提供一种改善抑郁症绝望无助行为的药物或制剂。[0008]本发明的另一目的在于提供雄海马在制备促进单胺类神经递质表达的药物或制剂中的应用。[0009]本发明的另一目的在于提供一种促进单胺类神经递质表达的药物或制剂。[0010]为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：本发明通过慢性温和不可预知性刺激CUMS建立小鼠抑郁症模型，给小鼠饲喂含有雄海马的饲料，通过强迫游泳实验评价雄海马抗抑郁样行为的效果，通过高效液相色谱法HPLC检测小鼠海马脑区神经递质5-羟色胺5-HT、肾上腺素NE、多巴胺DA及其相应代谢产物5-羟吲哚乙酸5-HIAA、3-甲氧基-4-羟苯乙二醇MHPG、高香草酸HVA和3，4-二羟苯乙酸①OPAO的变化，以探讨其作用机制。[0011]结果表明，雄海马显著降低了小鼠在强迫游泳实验中的绝望不动时间，该行为学结果表明雄海马对CUMS诱导的抑郁绝望和自杀行为有着明显的改善效果。同时，上述行为学的改变伴随着小鼠海马脑区的5-羟色胺、肾上腺素、多巴胺、5-羟吲哚乙酸、3-甲氧基-4-羟苯乙二醇、高香草酸和3，4_二羟苯乙酸含量上调。[0012]由于抑郁症经典假说一一单胺类神经递质缺乏假说中的标志性指标为5-羟色胺、肾上腺素、多巴胺及其相应代谢产物5-羟吲哚乙酸、3-甲氧基-4-羟苯乙二醇、高香草酸和3,4_二羟苯乙酸的异常，而多种单胺类神经递质系统功能失去平衡是导致抑郁症发生的关键。因此推测雄海马的作用机制可能是通过诱导小鼠海马脑区的5-羟色胺、肾上腺素、多巴胺、5-羟吲哚乙酸、3-甲氧基-4-羟苯乙二醇、高香草酸和3,4_二羟苯乙酸含量上调，恢复小鼠脑内神经递质水平，维持神经递质系统的功能平衡，进而改善CUMS诱导的抑郁绝望和自杀行为。[0013]因此，本发明请求保护雄海马在制备改善抑郁症绝望无助行为药物或制剂中的应用。[0014]优选地，所述抑郁症绝望无助行为包括绝望无助和自杀行为。[0015]优选地，所述雄海马能调控小鼠海马脑区神经递质及其代谢物的变化。[0016]优选地，所述雄海马能诱导小鼠海马脑区的5-羟色胺、肾上腺素、多巴胺、5-羟吲哚乙酸、3-甲氧基-4-羟苯乙二醇、高香草酸和3,4_二羟苯乙酸含量上调。[0017]本发明还请求保护一种改善抑郁症绝望无助行为的药物或制剂，包含雄海马。[0018]优选地，所述药物或制剂还包含药学上可接受的辅料。[0019]优选地，所述药物或制剂中雄海马的质量分数为0.22%。[0020]本发明还请求保护雄海马在制备促进单胺类神经递质表达的药物或制剂中的应用。[0021]本发明还请求保护一种促进单胺类神经递质表达的药物或制剂，包含雄海马。[0022]与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明通过慢性温和不可预知性刺激建立小鼠抑郁症模型，给小鼠饲喂含有雄海马的饲料，通过强迫游泳实验评价雄海马抗抑郁样行为的效果，通过HPLC等分子生物学技术检测其可能的机制。本发明发现雄海马通过调控小鼠海马脑区神经递质及其代谢物的变化，恢复小鼠脑内神经递质水平，进而改善CUMS诱导的抑郁绝望行为，为研究开发新的抗抑郁药物提供了新的途径。附图说明[0023]图1为本发明实验流程图。[0024]图2为实施例1中雄海马对小鼠强迫游泳实验中绝望不动时间的影响结果。[0025]图3为实施例2中小鼠海马脑区神经递质及其代谢物的含量变化;A为NE含量，B为NEMHPG含量，C为5-HT含量，D为5-HT5-HIAA含量，E为DA含量，F为DAD0PAC含量，G为DAHVA含量。具体实施方式[0026]下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法;所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均为可从商业途径得到的试剂和材料。[0027]性成熟雌性C57BL6小鼠，体重20〜22g，购自山东省实验动物中心动物质量合格证SCXK鲁）20140007。饲养环境:小鼠每笼5只饲养，22±1°C温度，50±10%湿度，12h光照一黑暗循环，自由摄食饮水。实验动物的饲养和操作过程均遵守广东海洋大学实验动物饲养和使用的相关规定。[0028]雄性浅纹海马：由深圳万骐海洋生物公司提供。[0029]大小鼠维持粉末饲料:广东省实验动物中心提供。[0030]海马饲料：向大小鼠维持粉末饲料中加入雄海马，其质量分数为0.22%，委托广东省实验动物中心加工制成颗粒饲料，SPF级真空包装。[0031]行为学仪器:上海欣软信息科技有限公司。[0032]实施例1雄海马对小鼠强迫游泳实验的影响1、小鼠抑郁症模型的建立参考PappandWillnerPappetai.，1992的方法并进行适用性修改，动物购回在实验室适应一周后，随机编号分组，共设置4组，如表1所示：表1实验动物分组CUMS组和CUMS+Seahorses组暴露在以下应激源，做模型处理;Control组和Seahorses组在标准环境下饲养，不做应激处理。[0033]所有的应激源随机独立操作，保证在一周内不重复，以免动物产生适应性，每天独立操作2个应激源，持续应激8周后，测行为。应激源有:禁水12h后空水瓶6h刺激，垫料异味处理，100rmin的摇床30min，50mL离心管束缚lh，4〜10°C低温环境lh，倾斜笼子过夜，闪光灯照射过夜，每隔3h开关灯切换持续24h，昼夜通亮灯光照射24h，拥挤环境6h，15°C冷水游泳IOmin〇[0034]2、强迫游泳实验强迫游泳装置为圆柱型透明容器直径11cm，高度30cm。实验前24h，25°C水温、20cm水深小鼠预强迫游泳IOmin。正式实验5min，记录小鼠5min内绝望不动时间。[0035]3、结果如图2所示，结果表明：与对照组比较，CUMS造成小鼠绝望不动时间延长27.85%;而给予雄海马治疗后，与CUMS组相比较，绝望不动时间下调了23.05%，表明雄海马可改善小鼠抑郁绝望行为。[0036]实施例2雄海马对小鼠海马脑区神经递质及其代谢物含量的影响1、小鼠海马脑组织脂肪酸提取小鼠断头牺牲后，冰上快速分离海马组织于液氮中速冻，然后转移至_80°C保存备用。[0037]总脂肪酸提取:组织匀浆，在通风橱中操作，向每管加入10.5mL氯仿甲醇二者体积比为2:1溶液，IOOyL含量为2mgmLC23:0作为内标，充入N2后盖紧盖子，渦旋30s，然后用超声清洗10〜15min至无明显块状;再次涡旋30s，然后加入2.6mL0.88%的NaCl溶液，充满N2后盖紧盖子，再次渦旋15s;于转速500rmin离心20min。[0038]过滤装置的制备：用CH2CL2滴洗玻璃漏斗直径大约6〜10cm，滤纸放于漏斗中，用CH2CL2滴湿润滤纸；加少量Na2SO45〜IOg至滤纸上，将预先称重的尖底、带刻度、有盖5mL离心管置于漏斗下。离心结束后吸取下层液体加入上述漏斗中（注意:所有操作不同样品换玻璃吸管）。待液体全部过滤到离心管中，再加大约3mLCHCL3从漏斗上滴洗下去，收集滤液。氮吹仪下干燥，不断调低犯针位置到液面上0.5cm处，直至吹干液体，即得到脑组织的总脂肪酸。[0039]2、脂肪酸甲酯化吹干总脂肪酸并加入3.5mL1.5%的硫酸甲醇溶液和1.5mL的二氯甲烷溶液，涡旋混匀直到看不到液体油状），于l〇〇°C水浴Ih进行甲酯化。甲酯化完成后冷却5〜7min，加入3mL正己烧和ImL水，充满N2后盖紧盖子，渦旋30s，于转速500rmin离心2min，吸取上层液体转移到新的尖底、带刻度、有盖IOmL玻璃离心管中，下层液体加ImL正己烧，充满N2后盖紧盖子，涡旋30s，于转速500rmin离心2min，取上清转移到上述尖底、带刻度、有盖5mL玻璃离心管中，重复两次。合并三次上层液体，加2mL水，充满N2后盖紧盖子，涡旋IOs，于转速500rmin离心2min;离心上清吸取到刚吹干的尖底5mL玻璃离心管中，加入14〜13体积Na2S〇4，充满N2后盖紧盖子，倒置来回摇几次。然后将上清溶液充分吸到到另一预先称重的尖底玻璃离心管中（注意不能吸到Na2SO4。于氮吹仪下干燥，得到脂肪酸甲酯，称重，按10mgmL加入正己烷稀释，用于气相测定。[0040]3、HPLC色谱色谱柱为Poroshell120EC_Ci8分析柱（150mmX4.6mm，4ym，购自Agilent公司；流动相为柠檬酸-乙酸钠缓冲液50mmolL柠檬酸、50mmolL乙酸钠、0.5mmolL1-庚烷磺酸钠、5mmolL三乙胺、0.5mmolLNa2EDTA_甲醇（87:13，vv，pH值为3.8;流速为I.OmLmin，进样量为10yL，发射波长为330nm，激发波长为280nm。[0041]定性和定量方法:按脂肪酸标准品的保留时间定性样品的各个色谱峰;采用内标法以计算各脂肪酸的绝对含量ngmg，以探讨其作用机制。实验统计方法采用two-wayANOVA法。LSD事后分析，P〈0.05有统计意义。[0042]4、检测结果如图3所示，HPLC结果表明：与对照组比较，CUMS造成NE、NEMHPG、5-HT、5-HT5-HIAA、DA、DAHVA、DADOPAC分别下降了25·35%、43·48%、56·00%、42·02%、32·05%、36·75%、40·00%;而给予雄海马治疗后，与CUMS组相比较，NE、NEMHPG、5-HT、5-HT5-HIAA、DA、DAHVA、DADOPAC分别上调了36·93%、52·11%、141%、91·95%、25·47%、55·48%、66·67%，表明雄海马可以改善CUMS诱导的海马脑区神经递质异常，从而改善抑郁症状。[0043]最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

权利要求：1.雄海马在制备改善抑郁症绝望无助行为药物或制剂中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述抑郁症绝望无助行为包括绝望无助和自杀tx为。3.—种改善抑郁症绝望无助行为的药物或制剂，其特征在于，包含雄海马。4.根据权利要求3所述的药物或制剂，其特征在于，还包含药学上可接受的辅料。5.根据权利要求3所述的药物或制剂，其特征在于，所述药物或制剂中雄海马的质量分数为0.22%。6.雄海马在制备促进单胺类神经递质表达的药物或制剂中的应用。7.—种促进单胺类神经递质表达的药物或制剂，其特征在于，包含雄海马。

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