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申请/专利权人:闽卉(福建)园艺有限公司
摘要:本发明涉及多肉植物栽培技术领域,特别涉及一种女王芦荟的组培方法;通过选取女王芦荟顶芽作为外植体,通过愈伤诱导、愈伤扩繁培养、愈伤分化培养以及生根壮苗培养,通过分别对愈伤培养基、分化培养基以及生根壮苗培养基的改进,以及光照强度及时间条件的改进,通过无性繁殖培育出女王芦荟幼苗,上述方法相比传统的女王芦荟有性生殖培养方法,具有周期短、产量高、幼苗健壮及存活率高的优点。
主权项:1.一种女王芦荟的组培方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1:将女王芦荟的顶芽切下,进行消毒处理后,切割成数块作为外植体,分别接种至愈伤培养基内培养12‑20d,光照强度为300‑500lux,光照时间为12‑14hd,女王芦荟外植体的切割部位脱分化为愈伤组织;所述愈伤培养基由以下配方配制而成:MS、2‑3mgL 6‑苄氨基腺嘌呤、0‑0.02mgL萘乙酸、23‑27gL蔗糖、3‑7gL卡拉胶;步骤2:将步骤1中的得到的愈伤组织分接至新的愈伤培养基中进行愈伤扩繁培养,所述愈伤扩繁培养的周期为12‑20d,光照强度为300‑500lux,光照时间为12‑14hd;步骤3:愈伤组织扩繁培养1‑3代后;将愈伤组织接种至分化培养基,诱导愈伤组织进行分化培养,分化出丛生芽,所述分化培养的时间为20‑30d,光照强度为1500‑2000lux,光照时间为12‑14hd;所述分化培养基由以下配方配制而成:MS、0.05‑0.15mgL玉米素、0.05‑0.15mgL 2‑异戊烯腺嘌呤、23‑27gL蔗糖、3‑7gL卡拉胶;步骤4:将分化出的丛生芽分别接种至生根壮苗培养基中,进行生根壮苗培养,培育出女王芦荟幼苗;所述生根壮苗培养的时间为20‑30d,光照强度为1500‑2000lux,光照时间为12‑14hd;所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:13MS、0.05‑0.15mgL玉米素、0.005‑0.015mgL多效唑、0.05‑0.15mgL吲哚乙酸、0.05‑0.15mgL 2‑异戊烯腺嘌呤、23‑27gL蔗糖、3‑7gL卡拉胶;步骤5:将培育出的女王芦荟幼苗进行移栽,完成女王芦荟的组培。
全文数据:一种女王芦荟的组培方法技术领域[0001]本发明涉及多肉植物栽培技术领域,特别涉及一种女王芦荟的组培方法。背景技术[0002]女王芦荟属于多年生常绿多肉质草本植物,含有许多对人体有益的物质,尤其对各种灼伤、烫伤、晒伤的皮肤具有明显的疗效,并具有较高的观赏价值,是集药用、食用及观赏于一身的植物。[0003]女王芦荟植株要生长数年后才会开花结实,种子数量少,有性生殖的发芽率低,繁殖速度慢,且容易积累病菌,造成退化。因此需要研究一种繁殖效率高,种苗质量稳定,幼苗健壮的女王芦荟组培方法。发明内容[0004]本发明所要解决的技术问题是:提供一种繁殖效率高,种苗质量稳定,幼苗健壮的女王芦荟组培方法。[0005]为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案为:一种女王芦荟的组培方法,包括以下步骤:[0006]步骤1:将女王芦荟的顶芽切下,进行消毒处理后,切割成数块作为外植体,分别接种至愈伤培养基内培养12-20d,光照强度为300-5001UX,光照时间为12-14hd,女王芦荟外植体的切割部位脱分化为愈伤组织;[0007]所述愈伤培养基由以下配方配制而成:[0008]MS、2_3mgL6-节氨基腺噪呤、〇-〇.〇2mgL萘乙酸、23_27gL薦糖、3-7gL卡拉胶;[0009]步骤2:将步骤1中的得到的愈伤组织分接至新的愈伤培养基中进行愈伤扩繁培养,所述愈伤扩繁培养的周期为12_2〇d,光照强度为300_5001ux,光照时间为12_14hd;[0010]步骤3:愈伤组织扩繁培养1-3代后;将愈伤组织接种至分化培养基,诱导愈伤组织进行分化培养,分化出丛生芽,所述分化培养的时间为20-30d,光照强度为1500-20001ux,光照时间为12-14hd;所述分化培养基由以下配方配制而成:[0012]MS、0_〇5-0_l5mgL玉米素、0_〇5-〇.l5mgL2_异戊烯腺嘌呤、23-27gL鹿糖、3-7gL卡拉胶;[0013]步骤4:将分化出的丛生芽分别接种至生根壮苗培养基中,进行生根壮苗培养,培育出女王芦荟幼苗;[0014]所述生根壮苗培养的时间为20-30d,光照强度为1500-20001UX,光照时间为12-14hd;[0015]所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:[0016]13MS、0•05-0•15mgL玉米素、0•005-0•015mgL多效唑、0•05-0•15mgL吲哚乙酸、0•05-0•15mgL2-异戊烯腺嘌呤、23-27gL蔗糖、3-7gL卡拉胶;[0017]步骤5:将培育出的女王芦荟幼苗进行移栽,完成女王芦荟的组培。[0018]本发明的有益效果在于:女王芦荟的组培方法中,选取女王芦荟顶芽作为外植体,通过愈伤诱导、愈伤扩繁培养、愈伤分化培养以及生根壮苗培养,通过分别对愈伤培养基、分化培养基以及生根壮苗培养基的改进,以及光照强度及时间条件的改进,通过无性繁殖培育出女王芦荟幼苗,上述方法相比传统的女王芦荟有性生殖培养方法,具有周期短、产量高、幼苗健壮及存活率高的优点。具体实施方式[0019]为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果,以下结合实施方式予以说明。[0020]本发明最关键的构思在于:通过愈伤诱导、愈伤扩繁培养、愈伤分化培养以及生根壮苗培养,通过分别对愈伤培养基、分化培养基以及生根壮苗培养基的改进,以及光照强度及时间条件的改进,具有周期短、产量高、幼苗健壮及存活率高的优点。[0021]本发明提供一种女王芦荟的组培方法,包括以下步骤:[0022]步骤1:将女王芦荟的顶芽切下,进行消毒处理后,切割成数块作为外植体,分别接种至愈伤培养基内培养12-20d,光照强度为300-5001UX,光照时间为12-14hd,女王芦荟外植体的切割部位脱分化为愈伤组织;[0023]所述愈伤培养基由以下配方配制而成:[0024]MS、2-3mgL6-苄氨基腺嘌呤、0-0•02mgL萘乙酸、23-27gL鹿糖、3-7gL卡拉胶;[0025]步骤2:将步骤1中的得到的愈伤组织分接至新的愈伤培养基中进行愈伤扩繁培养,所述愈伤扩繁培养的周期为12_2〇d,光照强度为300-5001ux,光照时间为12-14hd;[0026]步骤3:愈伤组织扩繁培养1-3代后;将愈伤组织接种至分化培养基,诱导愈伤组织进行分化培养,分化出丛生芽,所述分化培养的时间为20-30d,光照强度为1500-20001ux,光照时间为12-14hd;[0027]所述分化培养基由以下配方配制而成:[0028]MS、0•05-0•15mgL玉米素、0•05-0•15mgL2-异戊烯腺嘌呤、23-27gL蔗糖、3-7gL卡拉胶;[0029]步骤4:将分化出的丛生芽分别接种至生根壮苗培养基中,进行生根壮苗培养,培育出女王芦荟幼苗;[0030]所述生根壮苗培养的时间为20-3〇d,光照强度为1500-20001UX,光照时间为12-14hd;[0031]所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:[0032]13MS、0•05-0•15mgL玉米素、0•005-0•015mgL多效唑、0.05-0•15mgL吲哚乙酸、0•〇5-〇•15mgL2-异戊烯腺嘌呤、23-27gL蔗糖、3-7gL卡拉胶;[0033]步骤5:将培育出的女王芦荟幼苗进行移栽,完成女王芦荟的组培。[0034]上述女王芦荟的培养基补充说明:通过在愈伤培养基中加入2-3mgL6-苄氨基腺嘌呤及少量的萘乙酸,并通过光照强度为300-5001uX的弱光照培养,能够促进女王芦荟组织的脱分化;在分化培养基中,通过加入0.05-0•15mgL玉米素和0.05-0.15mgL2-异戊烯腺嘌呤,并通过1500-20001ux的强光培养,能够有效促进女王芦荟愈伤组织分化为丛生芽,再将丛生芽进行分瓶,通过生根壮苗培养,利用13MS、0.05-0•15mgL玉米素、〇•〇〇5-0.015mgL多效唑、0•05-0.15mgL吲哚乙酸、0•05-0•15mgL2-异戊烯腺嘌呤的组合,配合强光照,能够促进女王芦荟根系的发育,使丛生芽发育成完整的植株。[0035]上述女王芦荟的组培方法中,选取女王芦荟顶芽作为外植体,通过愈伤诱导、愈伤扩繁培养、愈伤分化培养以及生根壮苗培养,通过分别对愈伤培养基、分化培养基以及生根壮苗培养基的改进,以及光照强度及时间条件的改进,通过无性繁殖培育出女王芦荟幼苗,上述方法相比传统的女王芦荟有性生殖培养方法,具有周期短、产量高、幼苗健壮及存活率局的优点。[0036]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述步骤1之前,还包括步骤:将女王芦荟母株放置在苗床上,干燥培养10-15d。[0037]由上述描述可知,通过干燥培养,能够减少女王芦荟表面细菌的滋生,有利于后续的消毒,能够减少女王芦荟组培时感染病菌的风险。[0038]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述步骤1中的消毒处理具体为:将经过干燥培养的女王芦荟母株的顶芽剪下,用无菌水擦洗,使用1%的升汞消毒15-20min,然后用清水冲洗3-5遍。[0039]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述愈伤培养基由以下配方配制而成:[0040]MS、2.5mgL6-苄氨基腺嘌呤、0-0_01mgL萘乙酸、25gL蔗糖、5gL卡拉胶。[0041]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述愈伤培养基由以下配方配制而成所述分化培养基由以下配方配制而成:[0042]MS、0.1mgL玉米素、0.1mgL2-异戊烯腺嘌呤、25gL蔗糖、5gL卡拉胶。[0043]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:[0044]13MS、0.lmgL玉米素、0.01mgL多效卩坐、0•lmgL卩引噪乙酸、0•lmgL2-异戊炼腺嘌呤、25gL蔗糖、5gL卡拉胶。[0045]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述愈伤扩繁培养的周期为15d,光照强度为4001ux,光照时间为13hd。[0046]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述分化培养的时间为25d,光照强度为17001ux,光照时间为13hd。[0047]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述生根壮苗培养的时间为25d,光照强度为17001ux,光照时间为13hd;[0048]进一步的,上述女王芦荟的组培方法中,所述愈伤扩繁培养、分化培养及生根壮苗培养的温度均为23-27°C。[0049]实施例1[0050]一种女王芦荟的组培方法,包括以下步骤:[0051]步骤1:将女王芦荟母株放置在苗床上,干燥培养12山将经过干燥培养的女王芦荟母株的顶芽剪下,用无菌水擦洗,使用1%的升汞消毒17min,然后用清水冲洗4遍,切割成数块作为外植体,分别接种至愈伤培养基内培养15d,光照强度为4001ux,光照时间为Whd,女王芦荟外植体的切割部位脱分化为愈伤组织;[0052]所述愈伤培养基由以下配方配制而成:[0053]MS、2.5mgL6_;氨基腺嘌呤、0.01mgL萘乙酸、25gL薦糖、5gL卡拉月父;[0054]步骤2:将步骤1中的得到的愈伤组织分接至新的愈伤培养基中进行愈伤扩繁培养,所述愈伤扩繁培养的周期为15d,光照强度为4001ux,光照时间为13hd;[0055]步骤3:愈伤组织扩繁培养2代后;将愈伤组织接种至分化培养基,诱导愈伤组织进行分化培养,分化出丛生芽,所述分化培养的时间为25d,光照强度为17001UX,光照时间为13hd;[OO56]所述分化培养基由以下配方配制而成:[0057]MS、0•lmgL玉米素、0•lmgL2-异戊烯腺嘌呤、25gL蔗糖、5gL卡拉胶;[0058]步骤4:将分化出的丛生芽分别接种至生根壮苗培养基中,进行生根壮苗培养,培育出女王芦荟幼苗;[0059]所述生根壮苗培养的时间为25d,光照强度为17001ux,光照时间为13hd;[0060]所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:[0061]13MS、0•lmgL玉米素、0•0lmgL多效唑、0•lmgL吲哚乙酸、0•lmgL2-异戊烯腺嘌呤、25gL蔗糖、5gL卡拉胶;[0062]步骤5:将培育出的女王芦荟幼苗进行移栽,完成女王芦荟的组培。[0063]实施例2[0064]—种女王芦荟的组培方法,包括以下步骤:[0065]步骤1:将女王芦荟母株放置在苗床上,干燥培养12d;将经过干燥培养的女王芦荟母株的顶芽剪下,用无菌水擦洗,使用1%的升汞消毒15min,然后用清水冲洗3遍,切割成数块作为外植体,分别接种至愈伤培养基内培养12d,光照强度为3001ux,光照时间为12hd,女王芦荟外植体的切割部位脱分化为愈伤组织;[0066]所述愈伤培养基由以下配方配制而成:[0067]MS、2mgL6_苄氨基腺嘌呤、23gL蔗糖、3gL卡拉胶;[0068]步骤2:将步骤1中的得到的愈伤组织分接至新的愈伤培养基中进行愈伤扩繁培养,所述愈伤扩繁培养的周期为12d,光照强度为3001ux,光照时间为12hd;[0069]步骤3:愈伤组织扩繁培养1代后;将愈伤组织接种至分化培养基,诱导愈伤组织进行分化培养,分化出丛生芽,所述分化培养的时间为20d,光照强度为1500lux,光照时间为12hd;[0070]所述分化培养基由以下配方配制而成:[0071]^^、0.051^凡玉米素、0_〇51^凡2-异戊烯腺嘌呤、238凡蔗糖、381卡拉胶;[0072]步骤4:将分化出的丛生芽分别接种至生根壮苗培养基中,进行生根壮苗培养,培育出女王芦荟幼苗;[0073]所述生根壮苗培养的时间为2〇d,光照强度为1500lux,光照时间为12hd;[OO74]所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:[0075]1:BMS、0•05mgL玉米素、0•0〇5mgL多效唑、〇.〇5mgL吲哚乙酸、0•052-异戊烯腺嘌呤、23gL蔗糖、3gL卡拉胶;[0076]步骤5:将培育出的女王芦荟幼苗进行移栽,完成女王芦荟的组培。[0077]实施例3[0078]一种女王芦荟的组培方法,包括以下步骤:[0079]步骤1:将女王芦荟母株放置在苗床上,干燥培养12d;将经过干燥培养的女王芦荟母株的顶芽剪下,用无菌水擦洗,使用1%的升汞消毒2〇min,然后用清水冲洗5遍,切割成数块作为外植体,分别接种至愈伤培养基内培养2〇d,光照强度为5001ux,光照时间为14hd,女王芦荟外植体的切割部位脱分化为愈伤组织;[0080]所述愈伤培养基由以下配方配制而成:[0081]MS、3mgL6-苄氨基腺嘌呤、0.02mgL萘乙酸、27gL蔗糖、7gL卡拉胶;[0082]步骤2:将步骤1中的得到的愈伤组织分接至新的愈伤培养基中进行愈伤扩繁培养,所述愈伤扩繁培养的周期为20d,光照强度为5001ux,光照时间为14hd;[0083]步骤3:愈伤组织扩繁培养3代后;将愈伤组织接种至分化培养基,诱导愈伤组织进行分化培养,分化出丛生芽,所述分化培养的时间为30d,光照强度为1500-20001UX,光照时间为14hd;[0084]所述分化培养基由以下配方配制而成:[0085]MS、0.15mgL玉米素、0•15mgL2-异戊稀腺嘌呤、27gL薦糖、7gL卡拉胶;[0086]步骤4:将分化出的丛生芽分别接种至生根壮苗培养基中,进行生根壮苗培养,培育出女王芦荟幼苗;[0087]所述生根壮苗培养的时间为30d,光照强度为20001UX,光照时间为14hd;[0088]所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:[0089]13MS、0_l5mgL玉米素、0.015mgL多效挫、0•15mgL卩引卩朵乙酸、0.15mgL2-异戊烯腺嘌呤、27gL蔗糖、7gL卡拉胶;[0090]步骤5:将培育出的女王芦荟幼苗进行移栽,完成女王芦荟的组培。[0091]以实施例1、实施例2以及实施例3的女王芦荟组培方法中,在愈伤诱导阶段试验结果中,实施例1中有5%的愈伤组织出现了玻璃化,实施例2中有3%的愈伤组织出现了玻璃化,实施例3则有10%的愈伤组织出现了玻璃化,愈伤组织玻璃化造成分化的丛生芽质量下降,使得分化出的女王芦荟幼苗较为瘦弱,其余的愈伤组织都能分化为健壮完整的植株。[0092]得到的女王芦荟幼苗移栽至基质土中培养,存活率均能达到80%以上。[0093]综上所述,本发明提供的通过在愈伤培养基中加入2-3mgL6-苄氨基腺嘌呤及少量的萘乙酸,并通过光照强度为300-5001uX的弱光照培养,能够促进女王芦荟组织的脱分化;在分化培养基中,通过加入0•05-0•15mgL玉米素和0.05-0.15mgL2-异戊烯腺嘌呤,并通过If0〇-2〇001ux的强光培养,能够有效促进女王芦荟愈伤组织分化为丛生芽,再将丛生芽进行分瓶,通过生根壮苗培养,利用13MS、0•05-0•15mgL玉米素、0•005-0.015mgL多效挫、0.05-0_15mgL吲哚乙酸、0.05-0.15mgL2-异戊烯腺嘌呤的组合,配合强光照,能够促进女王芦荟根系的发育,使丛生芽发育成完整的植株。[0094]通过选取女王芦荟顶芽作为外植体,通过愈伤诱导、愈伤扩繁培养、愈伤分化培养以及生根壮苗培养,通过分别对愈伤培养基、分化培养基以及生根壮苗培养基的改进,以及光照强度及时间条件的改进,通过无性繁殖培育出女王芦荟幼苗,上述方法相比传统的女王芦荟有性生殖培养方法,具有周期短、产量高、幼苗健壮及存活率高的优点。[0095]以上所述仅为本发明的实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换,或直接或间接运用在相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围内。
权利要求:1.一种女王芦荟的组培方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1:将女王芦荟的顶芽切下,进行消毒处理后,切割成数块作为外植体,分别接种至愈伤培养基内培养12-20d,光照强度为300-5001ux,光照时间为12-14hd,女王芦荟外植体的切割部位脱分化为愈伤组织;所述愈伤培养基由以下配方配制而成:MS、2-3mgL6-苄氨基腺嘌呤、〇-〇•〇2mgL萘乙酸、23-27gL蔗糖、3-7gL卡拉胶;步骤2:将步骤1中的得到的愈伤组织分接至新的愈伤培养基中进行愈伤扩繁培养,所述愈伤扩繁培养的周期为12-20d,光照强度为3〇〇-5001ux,光照时间为12-14hd;步骤3:愈伤组织扩繁培养I-3代后;将愈伤组织接种至分化培养基,诱导愈伤组织进行分化培养,分化出丛生芽,所述分化培养的时间为20-30d,光照强度为1500-20001ux,光照时间为12-14hd;所述分化培养基由以下配方配制而成:MS、0.05-0.15mgL玉米素、0.05-0.15mgL2-异戊烯腺嘌呤、23-27gL蔗糖、3-7gL卡拉胶;步骤4:将分化出的丛生芽分别接种至生根壮苗培养基中,进行生根壮苗培养,培育出女王芦荟幼苗;所述生根壮苗培养的时间为2〇-3〇d,光照强度为1500-20001ux,光照时间为12-14hd;所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:13MS、0•〇5_0•l5mgL玉米素、0•0〇5_〇•〇15mgL多效唑、0•05-0•15mgL吲哚乙酸、0•〇5-0•15mgL2_异戊烯腺嘌呤、23-27gL蔗糖、3-7gL卡拉胶;步骤5:将培育出的女王芦荟幼苗进行移栽,完成女王芦荟的组培。2.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述步骤1之前,还包括步骤:将女王芦荟母株放置在苗床上,干燥培养10-15d。3.根据权利要求2所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述步骤1中的消毒处理具体为:将经过干燥培养的女王芦荟母株的顶芽剪下,用无菌水擦洗,使用1%的升汞消毒15-20min,然后用清水冲洗3-5遍。4.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述愈伤培养基由以下配方配制而成:MS、2.5mgL6-苄氨基腺嘌呤、0-0•0lmgL萘乙酸、25gL蔗糖、5gL卡拉胶。5.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述愈伤培养基由以下配方配制而成所述分化培养基由以下配方配制而成:MS、0.lmgL玉米素、〇•lmgL2-异戊烯腺嘌呤、25gL蔗糖、5gL卡拉胶。6.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述生根壮苗培养基由以下配方配制而成:13MS、0.lmgL玉米素、〇•〇lmgL多效唑、0•lmgL吲哚乙酸、0•lmgL2_异戊烯腺嘌呤、25gL鹿糖、5gL卡拉胶。7.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述愈伤扩繁培养的周期为15d,光照强度为400lux,光照时间为13hd。8.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述分化培养的时间为25d,光照强度为17001ux,光照时间为13hd。9.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述生根壮苗培养的时间为25d,光照强度为1700lux,光照时间为13hd。10.根据权利要求1所述的女王芦荟的组培方法,其特征在于,所述愈伤扩繁培养、分化培养及生根壮苗培养的温度均为23-27°C。
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