买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：天津医科大学

申请日：2012-12-11

公开（公告）日：2013-03-06

公开（公告）号：CN102952888A

专利技术分类：.包括核酸 [3,2006.01,2018.01]

专利摘要：本发明公开了一种解脲脲原体和微小脲原体的检测方法，属于微孔反应板的检测技术。本发明是在包被有Uu和Up特异性探针的DNA-BINDING96孔测定板微孔内，分别加入经PCR扩增后热变性处理的临床样本，另外设立分别加入Uu、Up血清型标准株PCR扩增后热变性处理的阳性对照孔；经温箱杂交后洗板，拍干；每孔加入链亲和素辣根过氧化物酶结合物，后经洗板，晾干；每孔加入显色底物A、B，混匀后暗处显色，最后加入终止液，以颜色变化判断结果。本发明不仅解决了以液体培养基颜色改变判断阳性结果出现假阳性的问题，还能准确地进行Uu和Up的鉴别，提高了检测的敏感度，同时也实现了高通量的检测，可广泛用于临床筛查。

专利权项：一种解脲脲原体和微小脲原体的检测方法，其是按以下步骤进行的：①.在分别包被有Uu和Up特异性探针的DNA‑BINDING96孔测定板微孔内，分别加入20μl经PCR扩增后热变性处理的临床样本；另将分别包被有Uu和Up特异性探针的DNA‑BINDING96孔测定板4个阳性对照孔内，分别加入经PCR扩增后热变性处理的Uu血清型8标准株产物和Up血清型3标准株产物各20μl；上述各孔分别加180μl杂交液混匀，65 ℃温箱杂交60min，弃液后，用0.1%SDS洗液Ⅱ、TBST洗板，弃液拍干；    ②.每孔加入链亲和素辣根过氧化物酶∶封闭液1∶1000稀释的混合物50μl ,室温放置30分钟，用200μl TBST洗板后加入含1%SDS的洗液Ⅱ浸泡15分钟；再用TBST洗涤，晾干；③.每孔各加入显色底物A、B各50μl ,混匀后置于暗处显色20分钟,最后加入终止液50μl,以颜色变化判断结果；④.经PCR扩增后热变性处理的临床样本加入终止液后，包被Uu探针的孔变黄或经酶标仪在450nm处测定吸光度值大于0.500，而同时包被Up探针的孔为无色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值小于0.200则证明Uu阳性；包被Uu探针的孔为无色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值小于0.200，而同时包被Up探针的孔为黄色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值大于0.500则证明Up阳性；Uu、Up探针孔同时为黄色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值均大于0.500则证明同时感染Uu和Up；而同时为无色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值均小于0.200则证明无Uu和Up感染；Uu阳性对照  Uu探针孔为黄色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值均大于0.500，Up探针孔为无色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值小于0.200；Up阳性对照  Uu探针孔为无色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值小于0.200，Up探针孔为黄色或经酶标仪在450nm处测定吸光度值均大于0.500。

百度查询： 天津医科大学 解脲脲原体和微小脲原体的检测方法