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申请/专利权人：河南师范大学

摘要：本发明属于荧光分析技术领域，具体涉及一种金银纳米簇AuAgNCs@APAP的制备方法及其作为荧光探针测定酸性和碱性氨基酸的应用。AuAgNCs@APAP荧光探针的制备方法，包括以下步骤：取0.235mL24.28mmolLHAuCl4溶液和0.235mL24.28mmolLAgNO3溶液于100mL烧杯中，加入2.17mL50mmolL对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10mL，10℃下反应2h，溶液由黄色变为灰色，用0.45μm的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用1kDa透析袋透析，即得所述AuAgNCs@APAP荧光探针。本发明利用对乙酰氨基酚（Acetaminophen，简称APAP），制备了一种金、银双金属纳米簇（AuAgNCs@APAP），并以AuAgNCs@APAP为荧光探针，该荧光探针稳定性好、荧光量子产率高而且其制备过程简便、耗时短，可很好的用于Arg、Lys、His、Asp和Glu的测定。

主权项：1.一种AuAgNCs@APAP荧光探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取0.235mL24.28mmolLHAuCl4溶液和0.235mL24.28mmolLAgNO3溶液于100mL烧杯中，加入2.17mL50mmolL对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10mL，10℃下反应2h，溶液由黄色变为灰色，用0.45μm的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用1kDa透析袋透析，即得所述AuAgNCs@APAP荧光探针。

全文数据：一种AuAgNCs@APAP荧光探针及其制备方法和在测定氨基酸中应用技术领域[0001]本发明属于焚光分析技术领域，具体涉及一种金银纳米簇AuAgNCsMPAP的制备方法及其作为荧光探针测定酸性和碱性氨基酸的应用。背景技术[0002]氨基酸可分为酸性氨基酸、中性氨基酸和碱性氨基酸。酸性氨基酸中的天门冬氨酸可作为K+、Mg2+离子的载体向心肌输送电解质，从而改善心肌收缩功能，同时降低氧消耗，在冠状动脉循环障碍缺氧时，对心肌有保护作用。谷氨酸大量存在于谷类蛋白质中，动物脑中含量也较多。谷氨酸在生物体内的蛋白质代谢过程中占重要地位，参与动物、植物和微生物中的许多重要化学反应。碱性氨基酸在医药上具有重要的价值，如赖氨酸可以治疗营养缺乏症、发育不全及氮平衡失调症，是重要的食品及饲料强化剂。[0003]氨基酸的测定方法有化学法、光化学法、色谱法和电化学法等。相对而言，荧光分析法具有操作简单、灵敏度高、检出限低等优点，建立一种测定氨基酸的荧光分析法是一件十分有意义的事情。发明内容[0004]本发明的目的是提供一种AuAgNCsMPAP荧光探针及其制备方法和在测定氨基酸中应用。[0005]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是，一种AuAgNCsMPAP荧光探针的制备方法，包括以下步骤：取〇.235mL24.28mmolLHAuCU溶液和〇.235mL24.28mmolLAgNO3溶液于IOOmL烧杯中，加入2.17mL50mmolL对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至IOmL，10°C下反应2h，溶液由黄色变为灰色，用0.45μπι的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用IkDa透析袋透析，即得所述AuAgNCsOAPAP焚光探针。[0006]本发明制备的AuAgNCsOAPAP荧光探针可在测定酸性和碱性氨基酸中应用。[0007]本发明产生的有益效果是：本发明利用对乙酰氨基酚（Acetaminophen，简称APAP，制备了一种金、银双金属纳米簇AuAgNCsMPAP，并以AuAgNCsMPAP为荧光探针，该荧光探针稳定性好、荧光量子产率高而且其制备过程简便、耗时短，可很好的用于精氨酸Arg、赖氨酸Lys、组氨酸His、天门冬氨酸Asp和谷氨酸Glu的测定。附图说明[0008]图1为APAP和AuAgNCsMPAP的红外谱图；图2为AuAgNCsOAPAP的的激发光谱、发射光谱图；图3是在激发波长为308nm条件下测定的APAP，AgNCsMPAP，AuNCsOAPAP，AuAgNCsMPAP的荧光发射光谱图；图4是不同激发下AuAgNCsOAPAP的荧光发射光谱图；图5是溶液pH对AuAgNCsOAPAP荧光强度的影响；图6对AuAgNCsOAPAP对Arg的选择性㈧和测定的抗干扰性能⑶；图7为常见干扰物质对检测Asp的影响，㈧为不同物质对荧光强度恢复的影响，⑶为常见干扰物质对检测Asp的干扰影响。具体实施方式[0009]制备通过一步合成法合成了AuAgNCsOAPAP，取HAuCU24.28mM，0.235mL溶液和AgNO324.28mM，0.235mL溶液于IOOmL夹套烧杯中，加入对乙酰氨基酚（50mM，2.17mL稀释至IOmL，10°C下反应2h，溶液由黄色变为灰色。用0.45μπι的亲水PTFE针式过滤器过滤，并用IkDa透析袋透析，放在4°C冰箱中暗处保存，备用。[0010]为了比较，在相同的实验条件分别将HAuCl4替换为AgN03、将AgNO3替换为HAuCl4下同时合成了AgNCsMPAP和AuNCsMPAP。[0011]表征图1为APAP和AuAgNCsMPAP的红外谱图。对于APAP，1241.56cm_1对应C-N的伸缩振动，1561.06cm_1是仲酰胺N-H的弯曲振动，1015.02cm_1的属于-OH的面内弯曲振动峰，1326.25cm_1处属于芳香杂环化合物中C-N伸缩振动特征吸收峰。而在AuAgNCsOAPAP谱图中，C-N的伸缩振动特征峰1241.56cm_1，仲酰胺N-H的弯曲振动特征峰1561.06CHT1，-0H的面内弯曲振动1015.02CHT1特征，芳香杂环化合物中C-N伸缩振动特征吸收峰1326.25CHT1，都没有观察到，而且仲酰胺N-H的伸缩振动特征峰3321.TecnfSC=O伸缩振动特征吸收峰1650.21cm_1也都有所偏移。这表明AuAgNCsOAPAP成功制备。[0012]图2给出了AuAgNCsMPAP的最佳激发峰和发射峰，分别为308nm和428nm。[0013]图3是在激发波长为308nm条件下测定的APAP，AgNCs@APAP，AuNCs@APAP，AuAgNCs@APAP的荧光发射光谱图。由图可知，AuAgNCsMPAP的荧光强度与相同合成条件下制备的AgNCsMPAP和AuNCsMPAP荧光强度相比，显著提高。[0014]图4是不同激发下AuAgNCsOAPAP的荧光发射光谱图。由图可知，改变激发波长，AuAgNCsMPAP的发射波长是不变的，表明观察到的荧光信号来自于自身的荧光信号而不是散射效应，进一步证明了成功合成AuAgNCsMPAP。[0015]以硫酸奎宁（0.IMH2S〇4,Oref=O.54作为标准，在308nm激发波长处AuAgNCsOAPAP的荧光量子产率为8.06%。[0016]AuAgNCsOAPAP的稳定性。AuAgNCsOAPAP在365nm的紫外灯照射90min，AuAgNCsOAPAP的荧光强度基本上保持不变。AuAgNCsMPAP4°C保存3个月，荧光强度几乎没有发生变化。300mMNaCl介质对AuAgNCsMPAP的荧光强度也没有影响。[0017]图5是溶液pH对AuAgNCsMPAP荧光强度的影响。由图可知，溶液呈酸性，焚光强度降低，溶液呈碱性，荧光强度增加。基于此，建立了该荧光探针对酸性氨基酸和碱性氨基酸的测定方法。氨基酸的测定⑴碱性氨基酸Arg，Lys，His的测定取I.OOmL稀释100倍的AuAgNCsOAPAP分别与一定体积的Arg，Lys，His混合，定容至4.0〇111匕在35€下反应3〇111；[11后，在激发波长308111]1处测定焚光强度。[0018]六找线性范围5-95以]«，回归方程为7=6.45591+102.47，相关系数1?2=0.9912。检出限LOD=3.04μΜ，对加入Arg浓度为25μΜ，75μΜ分别平行测定11次，相对标准偏差分别为1.20%和3.71%。[0019]Lys线性范围5-100μΜ，回归方程为7=6.27591+119.15，相关系数妒=0.9963。检出限LOD=3.13μΜ，对加入Lys浓度为25μΜ，75μΜ分别平行测定11次，相对标准偏差分别为0.87%和3.33%。[0020]His线性范围60-950μΜ，回归方程为y=0.5277Χ+397.2，相关系数R2=O.9947。检出限LOD=19.62μΜ，对加入His浓度为350μΜ分别平行测定11次，相对标准偏差为1.04%。[0021]⑵酸性氨基酸Asp，Glu的测定取I.OOmL稀释100倍的AuAgNCsOAPAP和0.38mL，ImM的Arg，然后分别加入不同浓度的Asp，Glu，定容至4.OOmL，在35°C下反应50min后，在激发波长308nm处测定焚光强度。[0022]Asp线性范围2·5-90μΜ，回归方程为y=-7·6083x+804·67，相关系数R2=O·9922。检出限LOD=2.5μΜ，对加入Asp浓度为55μΜ分别平行测定11次，相对标准偏差为4.54%。[0023]Glu线性范围5-95μΜ，回归方程为y=-6.1404χ+719.09，相关系数R2=O.9950。检出限LOD=3.19μΜ，对加入Arg浓度为55μΜ分别平行测定11次，相对标准2.91%。[0024]检测方法的选择性和抗干扰性能图6A为AuAgNCsOAPAP的选择性能。为了考察AuAgNCsOAPAP对Arg，Lys，His碱性氨基酸的选择性，选择Arg为代表，在相同的条件下考察了其它几种氨基酸:甘氨酸Gly，丙氨酸Ala，缬氨酸Val，亮氨酸Leu，异亮氨酸（lie，蛋氨酸Met，色氨酸Trp，丝氨酸Ser，及常见的糖类:葡萄糖Gluc，果糖Fru，乳糖Lac，鹿糖Sac，和尿素Urea，淀粉Sta，KN03，Na2S〇4对AuAgNCsMPAP荧光强度的影响。结果表明：只有Arg使AuAgNCsOAPAP的荧光强度增强。[0025]图6⑶为AuAgNCsMPAP测定Arg的抗干扰性能。当Arg的浓度为75μΜ，在体系中分别加入相同浓度的干扰物质，308nm激发波长下测定荧光强度。结果表明：常见干扰物质对Arg的测定几乎没有干扰。[0026]为了检测AuAgNCsOAPAP-Arg对Asp，Glu酸性氨基酸的选择性检验，选择Asp为代表，在相同的条件下考察了其它几种氨基酸:甘氨酸Gly，丙氨酸Ala，缬氨酸Val，亮氨酸Leu，蛋氨酸Met，色氨酸Trp，丝氨酸（Ser，及常见的糖类:葡萄糖Gluc，果糖Fru，乳糖Lac，鹿糖（Sac，和尿素Urea，淀粉Sta，KN〇3，Na2S〇4对AuAgNCsOAPAP-Ary体系荧光强度的影响。其中Asp的浓度为50μΜ，而其他物质的浓度为75μΜ。[0027]为了考察其它物质对AuAgNCsMPAP-Arg体系检测Asp的干扰，固定Asp的浓度为50μΜ，在检测体系中分别加入相同浓度的干扰物质，在308nm激发波长下测定荧光。[0028]图7A表明：只有Asp能使AuAgNCsMPAP-Arg的荧光强度有明显恢复。图7⑶表明：常见干扰物质对检测Asp的干扰不大。[0029]测定方法应用1人尿液中Arg的检测选择Arg为代表对尿样进行加标回收，当Arg分别为50μΜ，75μΜ时，实验结果如表1所示。[0030]表1人尿液中Arg的加标回收实验[0031]2人尿液中Asp的检测选择Asp为代表对尿样进行加标回收，当Asp分别为25μΜ，50μΜ时，实验结果见表2。表2人尿液中Asp的加标回收实验

权利要求：1.一种AuAgNCsMPAP荧光探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：取O.235mL24.28mmolLHA11CI4溶液和0.235mL24.28mmolLAgNO3溶液于100mL烧杯中，加入2.17mL50mmolL对乙酰氨基酚，并将混合溶液用去离子水稀释至10mL，10°C下反应2h，溶液由黄色变为灰色，用0.45μπι的亲水ΡΊΈΕ针式过滤器过滤，并用IkDa透析袋透析，即得所述AuAgNCsMPAP荧光探针。2.利用权利要求1的制备方法得到的AuAgNCsOAPAP荧光探针。3.权利要求2所述AuAgNCsOAPAP荧光探针在测定氨基酸中应用。

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