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申请/专利权人：庆尚国立大学校产学协力团

摘要：本发明涉及一种作为有效成分含有紫穗槐苷元amorphigeni或该紫穗槐苷元的盐的皮肤美白用组合物，本发明的紫穗槐苷元amorphigeni抑制酪氨酸酶tyrosinase的表达，并诱导黑色素melasosome的自我吞噬作用autophagy，由此证实本发明的紫穗槐苷元amorphigeni不仅抑制黑色素的生成，而且还具有消除因α‑MSHmelanocyte‑stimulatinghormone累积的黑色素的效果。因此，本发明的紫穗槐苷元amorphigeni作为皮肤美白和亮肤的功能性材料有用。

主权项：1.由下述化学式1表示的紫穗槐苷元或该紫穗槐苷元的化妆品学上可接受的盐作为唯一有效成分在制备皮肤美白用化妆材料组合物中的应用，化学式1：

全文数据：作为有效成分含有紫穗槐苷元的皮肤美白用组合物技术领域[0001]本发明涉及一种作为有效成分含有紫穗槐苷元的皮肤美白用组合物，更具体而言，涉及一种作为有效成分含有来自紫穗槐的紫穗槐苷元的具有皮肤美白功能的组合物，其特征在于，通过抑制酪氨酸酶tyrosinase的活性，减少黑色素melanin的生成以及减少已生成的黑色素含量。背景技术[0002]在人体组织中皮肤直接露出在外部环境，并起到人体的内部环境和外部环境之间的屏障作用，防御包括化学物质、紫外线在内的外部污染物质以及微生物的入侵，从而保护生物体免受周围环境侵害。另外，皮肤的颜色是由黑色素、血红蛋白（hemoglobin、胡罗卜素carotene等来决定，其中，黑色素起最重要的作用。黑色素除了决定人的肤色以外，还起到紫外线吸收作用、自由基清除剂Cfreeradicalscavenger等皮肤保护作用。然而，当因紫外线过度照射、大气污染、精神压力等外部环境的变化而使黑色素过多生成时，引起皮肤内色素沉着，成为皮肤黑化melanism，或色斑、雀斑等的原因。皮肤的黑化是因皮肤细胞对内在因素和外在因素的反应而产生的，代表性的因素是紫外线照射。即，当皮肤暴露在紫外线环境时，酪氨酸酶tyrosinase被活化，通过上述酪氨酸酶作用于皮肤组织中存在的酪氨酸而生成多巴（DOPA和多巴醌dopaquinone的氧化过程，在作为皮肤色素细胞的黑色素细胞melanocyte内的黑素体melanosome中，合成称为黑色素的聚合体，该黑色素被传递到皮肤角化细胞即角质形成细胞keratinocyte并通过角质化过程到达皮肤表面，从而保护皮肤免受紫外线伤害。因此，黑色素是人体中必不可少的紫外线防御剂，还承担着有效的自由基清除剂作用，去除使蛋白质、脂质、核酸等生物体成分发生变形的各种自由基。但是，当黑色素在局部过度合成、或因皮肤病变和老化而皮肤的生理机能下降时，黑色素沉着在皮肤表面，引发色斑、雀斑以及各种色素沉着。如上所述地，随着皮肤黑化的原因和机理的揭示，在美白化妆材料的制造中，通常采用将对参与皮肤黑化过程的酶即对酪氨酸酶的活性具有抑制效果的物质配合于化妆材料中的方法，或者通过在黑色素生成过程中抑制一些反应从而减少黑色素生成的方法。作为以上述目使用的代表性物质，有抗环血酸ascorbicacid、曲酸kojicacid、氢醌hydroquinone等化学物质；以及桑白皮提取物、甘草提取物等植物提取物。但是，抗环血酸不仅对氨酸酶活性的抑制效果不充分，而且分子自身的稳定性低，因此，不适合作为黑色素生成抑制剂；曲酸虽然对酪氨酸酶活性的抑制效果优秀，但配合于化妆材料中时发生变色，存在随着经时变化滴度Titer降低等稳定性问题，而且对皮肤的刺激性大，因此使用受限;氢醌由于存在皮肤刺激和安全性问题，在化妆材料中的使用受到限制。因此，新型且有效的美白成分的开发受到了关注。[0003]另外，日本特许公开第1994-016531号中，公开了化妆材料，韩国专利第1525090号中，公开了皮肤美白用化妆材料组合物。但是，尚没有公开本发明的作为有效成分含有紫穗槐苷元的皮肤美白用组合物。发明内容[0004]发明要解决的课题[0005]本发明是鉴于上述需求而完成的。本发明人从紫穗槐的根中分离以及提取出紫穗槐苷元amorphigeni，并确认了紫穗槐苷元抑制酪氨酸酶tyrosinase的表达，并且，由于诱导黑素体melanosome的自我吞作用autophagy，因此，本发明的紫穗槐苷元不仅能够抑制黑色素的生成，还能够发挥消除已生成的黑色素的效果，从而完成了本发明。[0006]解决课题的技术方案[0007]为了实现上述目的，本发明提供一种皮肤美白用化妆材料组合物，该组合物作为有效成分含有紫穗槐苷元amorphigeni或该紫穗槐苷元的化妆品学上可接受的盐。[0008]另外，本发明提供一种黑色素沉着过度症的预防或治疗用药物组合物，该组合物作为有效成分含有紫穗槐苷元amorphigeni或该紫穗槐苷元的药学上可接受的盐。[0009]另外，本发明提供一种黑色素沉着过度症的预防或改善用保健功能性食品组合物，该组合物作为有效成分含有紫穗槐苷元amorphigeni或该紫穗槐苷元的药学上可接受的盐。[0010]发明效果[0011]本发明涉及作为有效成分含有紫穗槐苷元amorphigeni的皮肤美白用组合物，确认了本发明的紫穗槐苷元amorphigeni抑制酪氨酸酶tyrosinase的表达，诱导黑素体melanosome的自我吞作用（autophagy，因此，本发明的紫穗槐苷元amorphigeni不仅能够抑制黑色素生成，而且还具有消除因a_MSHmelanocyte-stimulatinghormone已生成的黑色素的效果。由此，本发明的紫穗槐苷元amorphigeni作为皮肤美白和亮肤的功能性材料有用。附图说明[0012]图1表示本发明一实施例的从紫穗槐Amorphafruticosa的根中分离并精制的紫穗槐苷元amorphigeni的化学结构。[0013]图2表示本发明一实施例的将紫穗槐苷元以不同浓度在B16F10小鼠黑色素细胞中处理时的细胞存活率cellviability。[0014]图3表示本发明一实施例的将紫穗槐苷元在B16F10小鼠黑色素细胞中处理时，碘化丙啶PropidiumIodide染色后，通过流式细胞仪flowcytometer测量细胞周期的结果。[0015]图4表示本发明一实施例的处理α-MSH和紫穗槐苷元时，B16F10小鼠黑色素细胞内黑色素含量㈧以及L-DOPA氧化⑻的减少效果。[0016]图5表示本发明一实施例的处理a-MSH和紫穗槐苷元时，B16F10小鼠黑色素细胞内酪氨酸酶（Tyr,tyrosinase以及PMELpremelanosomeprotein的表达的抑制活性。a-微管蛋白（tubulin是内参照（loadingcontrol。[0017]图6表示本发明一实施例的处理α-MSH、紫穗槐苷元以及MG132时，B16F10小鼠黑色素细胞内酪氨酸酶TYR，tyrosinase以及PMELpremelanosomeprotein的表达量。a-微管蛋白（tubulin是内参照（loadingcontrol;MG132是蛋白酶抑制剂。[0018]图7表示本发明一实施例的处理α-MSH、紫穗槐苷元以及3-MA3-methyIadenine时，B16F10小鼠黑色素细胞内酪氨酸酶以及PMELpremelanosomeprotein的表达量的变化。α-微管蛋白（tubulin是内参照（loadingcontrol;3-MA是自我吞卩策抑制剂。[0019]图8表示本发明一实施例的处理敲除（knockdown了ATG5autophagy-relatedgene5的siATG5后，处理α-MSH以及紫穗槐苷元时，B16F10小鼠黑色素细胞内ATG5-ATG12、酪氨酸酶以及PMELpremelanosomeprotein的表达量的变化。a-微管蛋白（tubulin是内参照（loadingcontrol〇[0020]图9表示本发明一实施例的处理α-MSH、紫穗槐苷元以及3-MA3-methyIadenine时，B16F10小鼠黑色素细胞内黑色素含量（A以及L-DOPA氧化（B程度。α-微管蛋白tubulin是内参照（loadingcontrol;3_ΜΑ是自我吞卩策抑制剂。[0021]图10表示本发明一实施例的处理α-MSH并合成黑素体后处理紫穗槐苷元时，已生成的黑色素含量的减少。[0022]图11表示本发明一实施例的处理a-MSH并合成黑素体后处理紫穗槐苷元以及3-MA3-methyladenine时，B16F10小鼠黑色素细胞内已生成的黑色素含量的变化。[0023]图12表示本发明一实施例的处理α-MSH并合成黑素体后处理紫穗槐苷元以及3-MA3-methyladenine时，B16F10小鼠黑色素细胞内酪氨酸酶以及PMEL的表达水平的变化。a-微管蛋白（tubulin是内参照（loadingcontrol;3-MA是自我吞卩策抑制剂。具体实施方式[0024]为了实现本发明的目的，本发明提供一种皮肤美白用化妆材料组合物，其作为有效成分，含有由下述化学式1表示的紫穗槐苷元amorphigeni或者该紫穗槐苷元的化妆品学上可接受的盐。[0025]化学式1:[0027]本发明的皮肤美白用化妆材料组合物的有效成分是，具有由上述化学式1表示的结构的紫穗槐苷元amorphigeni。本发明的紫穗槐苷元能够显著减少黑色素细胞中黑色素的生成以及已生成的黑色素，从而具有皮肤美白活性。[0028]作为本发明组合物的有效成分的、紫穗槐苷元的化妆品学上可接受的盐，通过化妆品学上可接受的游离酸freeacid形成的酸加成盐是有用的。酸加成盐可通过常规方法制备，例如，可通过将化合物溶解于过量的酸水溶液中，并使用甲醇、乙醇、丙酮或乙腈等可与水混溶的有机溶剂，使该盐沉淀而制得。将同摩尔量的化合物以及水中的酸或醇（例如，二醇单甲醚进行加热，接着使上述混合物蒸发而进行干燥，或者可对所析出的盐进行吸滤。此时，作为游离酸可使用有机酸和无机酸，作为无机酸，可使用盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、酒石酸等；作为有机酸可使用甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸（maleic8^1、琥泊酸、草酸、苯甲酸、2,3-二轻基丁二酸、富马酸（;1；'1111^1'；[03^1、扁桃酸、丙酸propionicacid、梓檬酸（citricacid、乳酸（lacticacid、乙醇酸（glycollicacid、葡糖酸gluconicacid、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸glutaricacid、葡糖醛酸glucuronicacid、天冬氨酸、抗环血酸、碳酸、香草酸、氢碘酸等，但并不限定于此。[0029]另外，美白效果是指，改善或预防因紫外线照射、激素水平变化、遗传程序等各种因素产生的皮肤黝黑、色斑，雀斑、黑眼圈的效果，使皮肤透亮美丽、或保持透亮美丽皮肤的效果，缓解皮肤暗沉并增加光泽和紧致度的效果等。通常，黝黑皮肤、色斑、雀斑、黑眼圈是，由于紫外线刺激或激素水平的变化等，刺激了黑色素细胞melanocyte，由此所合成的黑色素沉着在皮肤上而产生的。因此，若能够抑制黑色素生成，也能够预防、改善黝黑皮肤、色斑、雀斑、黑眼圈。[0030]通过使用了培养色素细胞的试验法，确认了上述紫穗槐苷元对黑色素生成的抑制功能。色素细胞pigmentcell是具有黑色素生成功能的细胞，通常，培养该细胞的情况下，黑色素积累而发生黑化。对此，若在该培养系中存在对黑色素生成具有抑制功能的物质，则黑色素生成得以抑制而相对变白。从该相对变白的程度，能够预测黑色素生成的抑制功能。[0031]本发明的皮肤美白用化妆材料组合物中，上述紫穗槐苷元可以是由紫穗槐Amorphafruticosa的根中分离出的物质，但并不限定于此。[0032]本发明的皮肤美白用化妆材料组合物中，上述紫穗槐苷元可抑制酪氨酸酶tyrosinase的活性，但并不限定于此。[0033]本发明的皮肤美白用化妆材料组合物中，上述紫穗槐苷元可抑制黑色素melanin的生成或能够消除已生成的黑色素，但并不限定于此。[0034]本发明一实施例的化妆材料组合物中，上述皮肤美白用化妆材料组合物可以是选自于由皮肤外用软膏、霜剂、柔软化妆水、营养化妆水、面膜、精华素、生发剂、洗发剂、漂洗剂、护发素、头发护理剂、凝胶剂、皮肤乳液、皮肤柔软剂、爽肤水、收敛剂、乳液、牛奶乳液、保湿乳液、营养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底霜、营养精华、防晒霜、皂、清洁泡沫、清洁乳、清洁霜、身体乳液以及身体清洁剂所组成的组中的任意剂型，但并不限定于此。由上述各剂型构成的化妆材料组合物，可含有上述剂型的制剂化所需且适当的各种基质和添加物，本领域技术人员可容易选择这些成分的种类和使用量。[0035]本发明的化妆材料组合物除了有效成分以外，还可以含有显示相同或类似功能的一种以上皮肤美白活性成分。作为皮肤美白活性成分，有：曲酸及其衍生物、熊果苷、抗环血酸及其衍生物、氢醌及其衍生物、间苯二酚、环烷酮、亚甲基二氧苯基烷醇、2,7_二硝基吲唑或藤蜜提取物、米提取物、甘草提取物等植物提取物等，但并不限定于此。[0036]当本发明的化妆材料组合物的剂型为膏剂、霜剂或凝胶剂的情况下，作为载体成分，可使用动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌等。[0037]当本发明化妆材料组合物的剂型为粉剂或喷剂的情况下，作为载体成分，可使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末，尤其是，当为喷剂的情况下，还可以含有氟氯烃、丙烷-丁烷或二甲醚等推进剂。[0038]当本发明化妆材料组合物的剂型为溶液或悬浮液的情况下，作为载体成分，使用溶剂、增溶剂或乳化剂，例如，可使用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3_丁二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或脱水山梨糖醇的脂肪酸酯。[0039]当本发明化妆材料组合物的剂型为悬浮液的情况下，作为载体成分，可使用水、乙醇或丙二醇等液体稀释剂；乙氧基异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯等悬浮剂;微晶纤维素，偏氢氧化铝，膨润土，琼脂或黄蓍等。[0040]当本发明的化妆材料组合物的剂型为含表面活性剂的清洁剂的情况下，作为载体成分，可使用脂肪醇硫酸酯、脂肪醇醚硫酸酯、磺基琥珀酸单酯、乙酰硫酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、亚麻酸衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯等。[0041]本发明的化妆材料组合物还可以含有包括荧光物质、杀菌剂、向水性诱导物质、保湿剂、芳香剂、芳香剂载体、蛋白质、增溶剂、糖衍生物、防晒剂、维生素、植物提取物等在内的赋形剂。[0042]另外，本发明提供一种黑色素沉着过度症的预防或治疗用药物组合物，其作为有效成分含有紫穗槐苷元amorphigeni或紫穗槐苷元的药学上可接受的盐。[0043]上述盐，只要是药学上可接受的即可，没有特别的限定，例如，可使用盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢氟酸、氢溴酸、甲酸乙酸、2,3_二羟基丁二酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸等。除了酸加成盐以外，还可以使用氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、叔丁胺等碱加成盐。[0044]本说明书中使用的术语“黑色素沉着过度hyperpigmentation”是指，在皮肤或手脚指甲的特定部位，由于黑色素的过多增加，与其他部位相比变得更黑或更暗的现象。上述黑色素沉着过度症包括雀斑、老年斑、肝斑、色斑、褐色或黑色斑点、日光性色斑、蓝青色斑症（cyanicmelasma，药物使用引起的色素沉着过度，壬辰性黄褐斑（gravidicchloasma或因擦伤和烫伤等创伤或皮肤炎症引起的炎症后色素沉着过度等，但并不限定于此。[0045]本发明的药物组合物除了有效成分以外，还可以含有药学上可接受的载体，该载体是制剂时通常使用的载体，包括乳糖、葡萄糖、鹿糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸、丙基羟基苯甲酸、滑石、硬脂酸镁和矿物油等，但并不限定于此。本发明的药物组合物除了上述成分以外，还可以包括润滑剂、润湿剂、调味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂等。合适的药学上可接受载体和制剂，已详细记载在雷明顿的药物科学Remington’sPharmaceuticalSciences，19thed·，1995中。[0046]本发明的药物组合物的合适的给药量，可根据制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病状、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度以及反应灵敏性等因素决定。另夕卜，本发明药物组合物的给药量，优选为每天〇.0001〜l〇〇mgkg体重）。[0047]本发明的药物组合物可通过口服或肠胃外途径给药，肠胃外给药的情况下，可采用皮肤局部上涂覆、静脉内注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、透皮给药等方式给药。考虑到本发明的药物组合物使用于黑色素沉着过度症的治疗或预防，优选采用皮肤局部涂覆的方式。[0048]本发明的组合物中包含的有效成分浓度，可根据治疗目的、患者的状态、所需时间等决定，并不限定在特定范围的浓度。[0049]本发明的药物组合物可通过本领域普通技术人员容易实施的方法，并使用药学上可接受的载体或赋形剂制剂化，从而制成单位容量形态或注入多容量容器内而制造。此时，所制造的剂型可以是选自于注射剂、霜剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、乳剂、搽剂、糊剂和泥敷剂中的任一剂型，还可以包含分散剂或稳定剂。[0050]另外，本发明提供一种黑色素沉着过度症的预防或改善用的保健功能性食品组合物，其作为有效成分，包含紫穗槐苷元amorphigeni或该紫穗槐苷元的药学上可接受的盐。[0051]当将本发明的保健功能性食品组合物用作食品添加物的情况下，可直接添加上述保健功能性食品组合物，还可以与其他食品或食品成分一同使用，可通过常规方法适当地使用。有效成分的混合量可根据其使用目的（预防或改善适当地使用。通常，当制造食品或饮料时，相对于原料，本发明保健功能性食品组合物的添加量为15重量份以下，优选为10重量份以下。当为以保健和卫生为目的、或以调节健康为目的而长期摄取的情况下，上述添加量可以是上述范围以下，由于在安全性方面不存在任何问题，因此，有效成分的使用量可以是上述范围以上。[0052]上述保健性功能食品的种类没有特别的限定。能够添加上述保健功能性食品组合物的食品的具体例，可举出包括肉类、香肠、面包、巧克力、糖果类、快餐零食类、饼干类、比萨、拉面、其他面类、口香糖、冰淇淋类在内的奶农制品，各种汤、饮料、茶清凉剂、酒精饮料以及复合维生素剂等，包括所有通常意义上的保健食品。[0053]另外，本发明的保健功能性食品组合物可制成食品，特别是可制成功能性食品。本发明的功能性食品包括制造食品时通常添加的成分，例如，包括蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养素和调味剂。例如，当制成清凉剂的情况下，除了有效成分以外，作为添加成分，还可以包含天然碳水化合物或香味剂。上述天然碳水化合物优选为单糖类例如葡萄糖、果糖等），二糖类例如麦芽糖、蔗糖等），低聚糖，多糖类例如糊精、环糊精等），或糖醇例如木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等）。上述香味剂可使用天然香味剂例如索马甜、甜叶菊提取物等和合成香味剂例如糖精、阿斯巴甜等）。[0054]除了上述保健功能性食品组合物以外，还可以包含各种营养剂、维生素、电解质、风味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、PH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、使用于碳酸饮料中的碳化剂等。上述添加成分的比率并不是很重要，但通常相对于本发明的保健功能性食品组合物100重量份，为0.01〜0.1重量份的范围内。[0055]下面，通过实施例更详细地说明本发明。本领域技术人员应当明白，这些实施例仅为了更具体地说明本发明而提供，本发明的范围并不限定于这些实施例。[0056]材料及方法[0057]1·紫穗槐苷元amorphigeni的分离及提取[0058]为了分离及提取紫穗槐苷元，将阴干的0.5kg的紫穗槐A.fruticosa的根中添加5L的丙酮并提取7天。减压浓缩提取液而获得了21g的浓缩物，并利用硅胶柱（10X30cm对所制造的浓缩物实施了一步分离。此时，使用己烷-丙酮作为洗脱溶剂，通过将己烷-丙酮混合溶液的极性从100:1增加至100%vV丙酮并进行洗脱而获得7个馏分A-G。将含有大量目标化合物即紫穗槐苷元Amorphigeni的馏分C浓缩而获得了浓缩物1.3g，并在己烷-丙酮4:1混合溶剂条件下对所获得的浓缩物1.3g进行硅胶柱色谱分离，从而获得了纯度为70%以上的紫穗槐苷元160mg。对获得的馏分实施用80%vv甲醇洗脱的凝胶色谱SephadexLH-20，获得了纯度为98%的紫穗槐苷元29mg。通过1H-匪R、13C-NMR、2D-NMR、DEPT以及质谱仪器鉴定了所获得的化合物的结构。[0059]2.细胞培养及化合物[0060]B16F10小鼠黑色素瘤细胞mousemelanomacell系由ATCCAmericanTypeofCultureCollection，USA提供，上述细胞是通过添加了10%FBSfetalbovineserum和I%青霉素链霉素（Sigma-Aldrich，USA的DMEDulbecco’sModifiedEagle’s培养基，并在5%⑶2加湿培养箱中以37°C条件下培养的。α-MSHmelanocyte-stimulatinghormone和3-MA3-methyladenine从Sigma-Aldrich公司购买，酪氨酸-EDTA从LonzaUSA购买，MTT[3-4，5-dimethylthiazol_2-yl-2，5-diphenyltetrazoliumbromide是从AmrescoUSA购买，并用于下述实施例中。[0061]3.细胞存活率cellviability的测定[0062]将B16F10细胞在96-孔板中培养24小时后，在上述细胞中处理多种浓度的紫穗槐苷元，并培养了24小时。然后，在上述细胞中添加MTT5ygmL溶液培养3小时后，去除培养基，在细胞中处理DMSO并培养了20分钟，利用酶标仪microplatereader，Bio-Rad在595nm下测定了吸光度。[0063]4.黑色素melanin含量测定[0064]黑色素含量的测定，是通过稍许改变Yang等（Yangetal·，2006，ActapharmacologicaSinica27，1467-73方法而实施。将816?10细胞分注于6-孔板，培养24小时后，对上述细胞分别处理ΙμΜ的紫穗槐苷元amorphigeni和α-MSH，培养48小时。将所培养的细胞通过胰蛋白酶处理法trypsinization并在65°C下于包含DMSO的INNaOH中溶解24小时而获取，利用酶标仪microplatereader，Bi〇-Rad，在415nm下测定黑色素含量。[0065]5.酪氨酸酶tyrosinase活性的测定[0066]酪氨酸酶（tyrosinase活性是对Ohgushi等（Ohgushietal·，2009，Biologicalpharmaceuticalbulletin32,308-10方法稍许变更而实施。将B16F10细胞分注于6-孔板，培养24小时后，对上述细胞分别处理ΙμΜ的紫穗槐苷元amorphigeni和α-MSH并培养48小时后，将培养获得的上述细胞在冰浴中通过1%TritonX-100溶液溶解1小时。将蛋白质在5%⑶2加湿培养箱中在37°C条件下与IOOyL2mgmLL-DOPA—同培养4小时。然后，利用酶标仪microplatereader，Bio-Rad在490nm下测定吸光度。[0067]6.RNA提取及RT-PCR[0068]利用RiboEX试剂GeneAllBiotechnologyCo·Ltd，Seoul，Korea从细胞提取总RNA，cDNA是通过逆转录（ThermoScientific，Waltham，MA，USA并利用2yg的RNA进行合成。PCR是使用Solg™e-TaqDNA聚合酶试剂盒SolGentCo丄七1，06」6〇11，1〇代实施，并使用了下述表1所示的各引物。[0069]表1:本发明使用的引物[0071]7·蛋白免疫印迹Westernblot分析[0072]总蛋白质是利用RIPA缓冲液（50mMTris-HClpH8.0、150mMNaCl、l%NP-40、0.5%二氧化胆酸钠和0.1%SDS进行提取。将上述蛋白质在10〜15%SDS-PAGE相中进行分离后，通过PVDF膜Millipore，Billerica，MA，USA进行转移（transfer。上述膜是，在含有0·1%吐温20的TBStris-buffersaline中，与5%脱脂牛奶（skimmilk以及一级抗体primaryantibodiy一起培养了1小时。酪氨酸酶抗体是从SantaCruzBiotechnologyUSA购买；ATG5是从CSTCellSignalingTechnology，USA购买，PMEL抗体是从AbeamUK购买。[0073]8·基因沉寂（genesilencing[0074]由GenolutionSeoul，Korea合成适合于小鼠ATG5siRNA的siRNA，B16F10细胞是按照制造公司（Invitrogen公司）的指示，利用脂质体3000Invitrogen，Carlsbad，CA，USA转染siATG5后，在上述细胞中处理48小时的紫穗槐苷元amorphigeni，10μΜ和α-MSH1μΜ，然后确认了结果。[0075]9·统计分析（statisticalanalysis[0076]所有的数据是利用unpairedStudent’st-test进行分析，对于其结果，当为P〈0.05时，认为是统计学上的显著。[0077]实施例1.基于本发明紫穗槐苷元（amorphigeni处理的细胞存活率（cellviability分析[0078]在本实施例1中，为了找出黑色素细胞中诱导褪色（depigmentation的功能性植物代谢产物，从紫穗槐的根中分离了紫穗槐苷元amorphigeni图1。为了确认上述紫穗槐苷元的细胞毒性，在B16F10细胞中处理多种浓度的紫穗槐苷元，并培养了24小时，通过MTT3-4,5-dimethylthiazol_2-yl-2,5-diphenyltetrazoliumbromide分析确认了细胞存活率。其结果，如图2所示，紫穗槐苷元在100〜1600nM下时表现出弱的细胞毒性，但不诱导细胞死亡（图3。[0079]实施例2.基于本发明紫穗槐苷元amorphigeni处理的黑色素melanin含量减少效果[0080]为了研究紫穗槐苷元（amorphigeni是否能够抑制由α-MSHmelanocyte-stimulatinghormone诱导的色素沉着pigmentation，在B16F10细胞中分别或同时处理α-MSH和紫穗槐苷元并培养72小时。其结果，如图4所示，当仅处理α-MSH的情况下，黑色素含量和L-DOPA氧化程度的提高相当大，相反，一同处理紫穗槐苷元和α-MSH时，黑色素含量和L-DOPA氧化程度有减少的倾向。即，证实本发明的紫穗槐苷元减少黑色素含量，从而抑制色素沉着。[0081]实施例3.基于本发明紫穗槐苷元amorphigeni处理的蛋白酶体非依赖性-黑素体蛋白质消除效果[0082]B16F10黑色素细胞中处理α-MSH或者一同处理α-MSH和紫穗槐苷元amorphigeni48小时后，通过蛋白免疫印迹分别测定了酪氨酸酶（tyrosinase，TYR和PMELpremelanosomeprotein的蛋白质表达水平。其结果，如图5所示，本发明的紫穗槐苷元有效减少了由α-MSH增加的酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达量。[0083]为了确认紫穗槐苷元是否通过诱导蛋白酶体依赖性蛋白质分解过程而破坏酪氨酸酶以及PMEL蛋白质，在B16F10黑色素细胞中将a-MSH、紫穗槐苷元以及作为蛋白酶抑制剂的MG132—同处理48小时。之后，通过蛋白免疫印迹测定酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达水平，结果如图6所示，一同处理a-MSH、紫穗槐苷元以及MG132的细胞中，酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达量并未重新增加。从这些结果可证实，紫穗槐苷元的褪色depigmentation效果并不是由蛋白酶体依赖性蛋白质分解过程介导的，而是通过其他机制发生的。[0084]实施例4.基于本发明的紫穗槐苷元amorphigeni处理的自我吞作用依赖性黑素体消除效果[0085]为了确认紫穗槐苷元amorphigeni是否能够诱导自我吞噬作用而破坏酪氨酸酶tyrosinase以及PMEL蛋白质，在B16F10黑色素细胞中将α-MSH、紫穗槐苷元以及作为自我吞抑制剂的3MA3-methyladenine—同处理48小时。之后，通过蛋白免疫印迹测定酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达水平。其结果，如图7所示，一同处理α-MSH和紫穗槐苷元时所减少的酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达量，在一同处理α-MSH、紫穗槐苷元以及3MA的细胞中重新增加。[0086]为了确认在自我吞作用过程中发挥重要作用的自体autophagosomes延伸elongation相关的ATG5autophagy-relatedgene5的抑制是否影响紫穗槐苷元介导的裡色（depigmentation效果，用siATG5ATG5的knockdown转染B16F10黑色素细胞48小时以抑制自我吞噬作用。其结果，如图8所示，用siATG5转染抑制自我吞噬作用后一同处理α-MSH以及紫穗槐苷元时，酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达量重新增加，并且自噬体形成过程中结合的ATG5-ATG12的表达量减少。即，证实紫穗槐苷元在B16F10黑色素细胞中通过诱导自我吞噬作用而消除黑色素。[0087]另外，在B16F10黑色素细胞中将α-MSH、紫穗槐苷元以及3ΜΑ—同处理48小时后，测定了黑色素含量以及L-DOPA氧化程度#*P彡0.001。其结果，如图9所示证实一同处理a-MSH以及紫穗槐苷元时所减少的黑色素含量㈧以及L-DOPA氧化程度，在一同处理a-MSH、紫穗槐苷元以及3MA的细胞中重新增加。[0088]实施例5.基于本发明的紫穗槐苷元amorphigeni处理的已生成的黑素体破坏效果[0089]为了确认紫穗槐苷元是否破坏因α-MSH已生成的黑素体，在B16F10黑色素细胞中将a-MSH处理48小时而合成黑素体后，处理紫穗槐苷元48小时，然后测定了黑色素含量。其结果，如图10所示，证实有效减少了已生成的黑色素含量。[0090]另外，为了确认紫穗槐苷元是否通过自我吞噬作用破坏已生成的黑素体，在B16F10黑色素细胞中将a-MSH处理48小时而合成黑素体后，将紫穗槐苷元与作为自我吞噬抑制剂的3MA—同处理48小时。之后，通过黑色素含量和酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达水平进行测定ns=nosignificance，*P0·05·01，林*P0·001。其结果，如图11及图12所示，一同处理α-MSH以及紫穗槐苷元时所减少的黑色素含量、酪氨酸酶以及PMEL的蛋白质表达量，在一同处理α-MSH、紫穗槐苷元以及3MA的细胞中重新增加。[0091]因此，本发明的紫穗槐苷元诱导的自我吞噬作用在黑色素细胞中调节褪色，如紫穗槐苷元般黑素体自我吞噬作用的特异性诱导剂是在皮肤美白和亮肤制剂的开发中非常有用的材料。

权利要求：1.一种皮肤美白用化妆材料组合物，其作为有效成分含有由下述化学式1表示的紫穗槐苷元或该紫穗槐苷元的化妆品学上可接受的盐，化学式1:2.根据权利要求1所述的皮肤美白用化妆材料组合物，其特征在于，上述紫穗槐苷元是从紫穗槐的根中分离出来的。3.根据权利要求1所述的皮肤美白用化妆材料组合物，其特征在于，上述组合物抑制酪氨酸酶的活性。4.根据权利要求1所述的皮肤美白用化妆材料组合物，其特征在于，上述组合物抑制黑色素的生成或消除已生成的黑色素。5.根据权利要求1所述的皮肤美白用化妆材料组合物，其特征在于，上述组合物是选自于溶液、悬浮液、乳池液、膏剂、凝胶剂、霜剂、乳液、粉剂、阜、含表面活性剂的清洁剂、油、粉末粉底霜、乳液、粉底霜、蜡基粉底霜和喷剂中的任意剂型。6.—种黑色素沉着过度症的预防或治疗用药物组合物，其作为有效成分含有由下述化学式1表示的紫穗槐苷元或该紫穗槐苷元的药学上可接受的盐，化学式1:7.根据权利要求6所述的黑色素沉着过度症的预防或治疗用药物组合物，其特征在于，上述黑色素沉着过度症是雀斑、老年斑、肝斑、色斑、褐色或黑色斑点、日光性色斑、蓝青色斑症、药物使用引起的色素沉着过度、壬辰性黄褐斑、或因擦伤和烫伤等创伤或因皮肤炎症引起的炎症后色素沉着过度。8.根据权利要求6所述的黑色素沉着过度症的预防或治疗用药物组合物，其特征在于，将上述组合物制成选自于注射剂、霜剂、贴剂、喷雾剂、软膏剂、硬膏剂、乳剂、搽剂、糊剂和泥敷剂中的任一剂型。9.一种黑色素沉着过度症的预防或改善用的保健功能性食品组合物，其作为有效成分含有由下述化学式1表示的紫穗槐苷元或该紫穗槐苷元的药学上可接受的盐，化学式1:

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