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申请/专利权人：江苏豪森药业集团有限公司

摘要：本发明提供一种醋酸艾替班特的制备方法，特别地提供一种纯度高、杂质含量低、合成效率高且收率高的醋酸艾替班特的制备方法，所得产品质量稳定。本发明的方法反应条件温和，对设备损害低，工艺简单，绿色环保且成本低，能够确保连续生产出高质量的产品，具有较高的应用价值，适合产业化生产。

主权项：1.一种醋酸艾替班特的制备方法，其特征在于，Fmoc-ArgPbf-Wang树脂依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH反应，然后裂解得到中间体1，中间体1经过纯化、转盐、冻干得到醋酸艾替班特；所述裂解步骤使用的裂解液由三氟乙酸、二硫苏糖醇、三异丙基硅烷、茴香硫醚和水组成，所述裂解液的用量比例为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷=90：2.5：2.5：2.5：2.5；裂解步骤的温度为32℃；裂解步骤的时间为3.5小时；制备过程中使用沉降溶剂，所述沉降溶剂为异丙醚；纯化分别采用磷酸盐体系进行一次纯化；采用三氟乙酸体系进行二次纯化；磷酸盐体系包含流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液；流动相B：乙腈，梯度斜率为0.1%；三氟乙酸体系包含流动相A：0.05%三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05%三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.5%。

全文数据：醋酸艾替班特的制备方法技术领域本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种醋酸艾替班特的制备方法。背景技术醋酸艾替班特Firazyr是缓激肽B2受体拮抗剂，具有如下所示的结构式:醋酸艾替班特最初是由Sanofi开发，2001年11月Jerini公司获得醋酸艾替班特的开发权。2008年9月首次在德国和英国上市，2009年3月在欧盟上市，2011年10月在美国上市。FDA批准用于18岁及以上成年人的遗传性血管水肿hereditaryangioedema，HAE急性发作治疗，遗传性血管水肿是由于一种称为C1抑制剂的蛋白水平低或功能障碍引起的，不可预知的手、脚、脸、喉头和腹部的发作性水肿和肿胀，导致毁容、失能或死亡。艾替班特通过抑制与HAE的栓塞局部肿胀、炎症、疼痛症状有关的缓激肽的影响而治疗急性HAE的栓塞局部肿胀。然而，现有醋酸艾替班特的制备方法产品纯度低、杂质含量高、合成效率低、收率低，无法确保连续生产出质量稳定的产品，不适合产业化生产，应用价值低。专利申请201210028377.9报道了直接固相合成艾替班特的方法，采用2-氯三苯基氯树脂为起始载体，但该工艺反应条件要求高、操作复杂、成本高，在合成过程中会有部分肽链从树脂上脱落，导致最终收率低，不适合产业化生产。专利申请201410347572.1利用Wang王树脂或对羟甲基苯氧甲基聚苯乙烯树脂作为载体，Fmoc-ArgPbf-OH在偶联试剂和活化试剂作用下和树脂载体进行酯化反应得到肽树脂，但是该方法制得的产品中杂质含量高，效率及收率低。另外，现有技术中还存在以Boc-ArgTos-Merrifield-树脂为固相载体合成醋酸艾替班特的方法，该方法合成过程中需大量使用无水氟化氢等强腐蚀性溶剂，对设备要求和损害高，同时不利于环境保护和劳动保护。发明内容针对上述问题，本发明的目的在于提供一种纯度高、杂质含量低、合成效率高、反应条件温和、工艺简单、环境友好、成本低且收率高的醋酸艾替班特的制备方法。本发明上述目的是通过如下技术方案来实现的：Fmoc-ArgPbf-Wang树脂依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH反应，然后裂解得到中间体1，中间体1经过纯化、转盐、冻干得到醋酸艾替班特。优选的，制备过程中使用沉降溶剂，所述沉降溶剂选自异丙醚、甲基叔丁基醚中的一种或两种。优选的，裂解步骤使用的裂解液选自三异丙基硅烷、1，2一乙二硫醇、苯酚、二硫苏糖醇、三氟乙酸、茴香硫醚、苯甲醚、水中的组合。优选的，裂解液包括三氟乙酸、二硫苏糖醇、三异丙基硅烷、茴香硫醚和水。优选的裂解液的用量比例为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝80-95：1-5：1-5：1-5：1-5。优选的，裂解温度为27-33℃。优选的，裂解时间为2-6小时。优选的，纯化工序为两次纯化分别为，采用磷酸盐体系进行一次纯化；采用三氟乙酸体系进行二次纯化。发明人发现，沉降溶剂选自异丙醚、甲基叔丁基醚时产品的纯度和收率优势明显。裂解液选自三异丙基硅烷、1，2一乙二硫醇、苯酚、二硫苏糖醇、三氟乙酸、茴香硫醚、苯甲醚、水中的组合时，尤其是包含上述组合中五种以上的组成时，产品的纯度和收率均能得到有效提升。发明人还发现，当将裂解温度和时间分别控制在一定范围内时，杂质含量明显降低，合成效率及产品收率均提升明显。另外，采用磷酸盐体系流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈0.1-0.25％梯度斜率进行一次纯化，采用三氟乙酸体系流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液0.25-0.5％梯度斜率进行二次纯化，能明显提升杂质的分离效果。本发明通过上述技术方案，实现了纯度高、杂质含量低、合成效率高且收率高的醋酸艾替班特的制备，所得产品质量稳定，反应条件温和，对设备损害低，工艺简单，绿色环保、环境友好且成本低，能够确保连续生产出高质量的产品，具有较高的应用价值，适合产业化生产。具体实施方式本发明的如下具体实施方式仅为进一步解释或说明本发明，不应被解释为对本发明的任何限制。实施例1将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝80：5：5：5：5，裂解温度为28℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加甲基叔丁基醚搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.25％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.25％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为75.12％，纯度为99.78％。实施例2将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝90：2.5：2.5：2.5：2.5，裂解温度为32℃，反应3.5小时，反应结束后裂解液添加异丙醚搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.1％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.5％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为81.72％，纯度为99.95％。实施例3将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝85：4：4：3.5：3.5，裂解温度为30℃，反应4小时，反应结束后裂解液添加甲基叔丁基醚搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.2％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.4％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为74.39％，纯度为99.69％。实施例4将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝95：1：1：1.5：1.5，裂解温度为31℃，反应2小时，反应结束后裂解液添加异丙醚搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.15％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.3％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为77.47％，纯度为99.85％。对比例1将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝75：5：7.5：7.5：5，裂解温度为35℃，反应1小时，反应结束后裂解液添加乙醚搅拌，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.5％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.2％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为57.4％，纯度为98.4％。对比例2将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝75：5：7.5：7.5：5，裂解温度为35℃，反应1小时，反应结束后裂解液添加异丙醚，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.1％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.5％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为59.2％，纯度为98.9％。对比例3将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝75：5：7.5：7.5：5，裂解温度为30℃，反应3小时，反应结束后裂解液添加异丙醚，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.1％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.5％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为61.7％，纯度为99.4％。对比例4将Fmoc-ArgPbf-Wang树脂加入到合成容器中，依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH进行偶联反应，所得产物进行裂解得到中间体1，裂解液为三氟乙酸：水：三异丙基硅烷＝85：5：5，裂解温度为30℃，反应3.5小时，反应结束后裂解液添加异丙醚，去除上清液、固体离心、打浆、真空干燥，得类白色固体，产物通过磷酸盐体系一次纯化，磷酸盐体系中，流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液，流动相B：乙腈，梯度斜率为0.1％，产物通过三氟乙酸体系做二次纯化，三氟乙酸体系中，流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.5％，产物进行制备柱转盐，进一步冻干，得到醋酸艾替班特纯品，总收率为36.7％，纯度为98.9％。以上试验结果表明，采用本发明的合成方法所获得的醋酸艾替班特产品的纯度和收率优势明显；本发明提供的方法合成效率高，操作简单，对环境危害小。

权利要求：1.一种醋酸艾替班特的制备方法，其特征在于，Fmoc-ArgPbf-Wang树脂依次与Fmoc-Oic-OH、Fmoc-D-Tic-OH、Fmoc-SertBu-OH、Fmoc-Thi-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-HyptBu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-ArgPbf-OH、Fmoc-D-ArgPbf-OH反应，然后裂解得到中间体1，中间体1经过纯化、转盐、冻干得到醋酸艾替班特。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备过程中使用沉降溶剂，所述沉降溶剂选自异丙醚、甲基叔丁基醚中的一种或两种。3.根据权利要求1所述的方法，所述裂解步骤使用的裂解液选自三异丙基硅烷、1,2一乙二硫醇、苯酚、二硫苏糖醇、三氟乙酸、茴香硫醚、苯甲醚、水中的组合。4.根据权利要求1所述的方法，所述裂解液包括三氟乙酸、二硫苏糖醇、三异丙基硅烷、茴香硫醚和水。5.根据权利要求1所述的方法，所述裂解液的用量比例为三氟乙酸：二硫苏糖醇：水：茴香硫醚：三异丙基硅烷＝80-95：1-5：1-5：1-5：1-5。6.根据权利要求1所述的方法，所述裂解步骤的温度为27-33℃。7.根据权利要求1所述的方法，所述裂解步骤的时间为2-6小时。8.根据权利要求1所述的方法，纯化分别采用磷酸盐体系进行一次纯化；采用三氟乙酸体系进行二次纯化。9.根据权利要求1所述的方法，磷酸盐体系包含流动相A：0.01M磷酸二氢钠缓冲液；流动相B：乙腈，梯度斜率为0.1-0.25％。10.根据权利要求1所述的方法，三氟乙酸体系包含流动相A：0.05％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.05％三氟乙酸乙腈溶液，梯度斜率为0.25-0.5％。

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