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申请/专利权人：中国人民解放军空军军医大学

摘要：本发明涉及疫苗制备技术领域，具体公开了一种基于VSV载体的HTNV疫苗及其制备方法和应用，通过将HTNV包膜糖蛋白的核苷酸序列插入到重组VSV载体质粒上构建重组质粒后，再进行包装、加工获得的具有免疫原性的HTNV重组VSV疫苗。本发明制备的HTNV疫苗为肾综合征出血热的防治提供新型候选疫苗。

主权项：1.一种基于VSV载体的HTNV疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，pCAGGS-HTNVMI532K质粒的构建：以质粒pUC-optiGPC为模板，设计突变引物optiGPC-F-infu、GPC-R-infu、optiGPC-I532Kseg1-R和optiGPC-I532Kseg2-F，将532位异亮氨酸点突变为赖氨酸，获得pCAGGS-HTNVMI532K质粒；分别以optiGPC-F-infu、optiGPC-I532Kseg1-R；optiGPC-I532Kseg2-F、optiGPC-R-infu为引物PCR扩增I532Kseg1和I532Kseg2，然后与经EcoRI和KpnI双酶切后的pCAGGS-X-myc载体连接，构建获得单突变质粒pCAGGS-HTNVMI532K；所述质粒pUC-optiGPC中optiGPC的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；S2，pCAGGS-HTNVMI532KS1094L质粒的构建：以pCAGGS-HTNVMI532K质粒为模板，设计optiGPC-S1094Lseg1-R引物和optiGPC-S1094Lseg2-F引物，将1094位点丝氨酸处点突变为亮氨酸，获得pCAGGS-HTNVMI532KS1094L质粒；分别以optiGPC-F-infu、optiGPC-S1094Lseg1-R；optiGPC-S1094Lseg2-F、optiGPC-R-infu为引物PCR扩增I532KS1094Lseg1和I532KS1094Lseg2，然后与经EcoRI和KpnI双酶切后的pCAGGS-X-myc载体连接，构建获得双突变质粒pCAGGS-HTNVMI532KS1094L；S3，重组质粒rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP的构建：以pCAGGS-HTNVMI532KS1094L质粒为模板，设计引物rVSV-SphI-M-F和SphI-GPC-C6-R引物，扩增目的片段HTNVMI532KS1094LΔC6，然后与经SphI单酶切后的质粒pVSVΔG-GFP连接，连接产物转化Stbl3感受态细胞，培养提取质粒，获得重组质粒rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP；S4，rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP疫苗的的制备：BHK-21细胞培养至细胞汇合度约90％时，VV-T7以MOI＝5感染BHK-212h，转染rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP质粒及辅助质粒pBS-N、pBS-P、pBS-G和pBS-L，制备得到rVSVΔG-HTNVMI532KS1094LΔC6-GFP疫苗。

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