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申请/专利权人：瑞普(保定)生物药业有限公司
摘要：本发明公开了一种猪瘟活疫苗的制备方法，属于生物技术领域。上述制备方法包括：1细胞制备：用无血清培养基培养全悬浮细胞，经重悬、传代培养、扩大培养，获取细胞液；2病毒液制备：将猪瘟病毒接种细胞液，然后补加维持液，采用流加培养方式连续培养收获病毒液；3病毒纯化：所收获的病毒液中加入羧甲基纤维素钠，静置过夜，过滤，收集滤出液；4疫苗冻干：滤出液中加入冻干保护剂，定量分装，真空冷冻干燥，制成猪瘟活疫苗。本发明采用无血清全悬浮培养的技术方法增殖猪瘟病毒，生产工艺易于放大、生产效率高，制备的疫苗效价高、安全性好且免疫效果更佳。
主权项：1.一种猪瘟活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）细胞制备用无血清培养基培养全悬浮细胞，经重悬、传代培养、扩大培养，获取细胞液；（2）病毒液制备将猪瘟病毒接种所述细胞液，然后补加维持液，所述维持液包括无血清培养基和辅助液，接毒后继续培养72~96h，首次收获病毒液；之后采用流加培养方式继续培养，连续培养收获10~15次病毒液；（3）病毒纯化所述病毒液中加入羧甲基纤维素钠，静置过夜，过滤，收集滤出液；（4）疫苗冻干所述滤出液中加入冻干保护剂，定量分装，真空冷冻干燥，制成猪瘟活疫苗；步骤（2）中，所述无血清培养基与所述辅助液体积比为99:1；其中，所述辅助液为PEG20005~10gL、硫酸锌0.1~0.3gL和PVPK300.5~1gL的水溶液；步骤（2）中，所述流加培养方式具体为：每次收获所述病毒液时，反应器中留存0.1~1%的病毒液，先补加培养体积比为120~18的所述细胞液，然后补加所述维持液至培养体积，37℃继续培养48~72小时，再次收获；步骤（3）中，按照所述病毒液总量计，向所述病毒液中加入质量体积百分比（m：V）0.05%-0.2%羧甲基纤维素钠，2~8℃静置过夜。
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权利要求：
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