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申请/专利权人：山西大学

摘要：本发明属于黄烷醇类物质检测技术领域，公开了一种同时测定山西老陈醋中两种黄烷醇类物质的SPE‑DES‑HPLC方法。该方法选用DiamonsilC18色谱柱，流速为1mLmin；进样量为10μL；检测波长为280nm；流动相为0.1％磷酸缓冲液与乙腈；梯度洗脱。通过优化实验最终确定活化后XAD‑2大孔吸附树脂用量为188mg，低共熔溶剂四乙基氯化铵—正辛酸，摩尔比1:3体积为400μL，吸附时间为11min，解析时间为20min时，两种黄烷醇类物质的富集效果最佳。在此条件下，儿茶素和表儿茶素的线性关系良好R20.99，检出限、定量限、日内、日间相对标准偏差以及加标回收率表明其与传统固相萃取繁琐的过程相比，更加简单、便捷且灵敏度高、基质干扰小，适用于山西老陈醋中儿茶素和表儿茶素的富集测定。

主权项：1.一种同时测定山西老陈醋中两种黄烷醇类物质的SPE-DES-HPLC方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，确定高效液相色谱条件：色谱柱选用DiamonsilC18色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；检测器为紫外检测器；流速为1mLmin；进样量为10μL；柱温为35℃；检测波长为280nm；流动相为体积百分比为0.1％的磷酸缓冲液与乙腈；洗脱方式为梯度洗脱，具体如下表： 步骤2，XAD-2大孔吸附树脂的活化取1g大孔树脂于容器中，加入5ml无水乙醇活化2小时，用蒸馏水水洗至无醇味，完成树脂活化；步骤3，标准储备液、标准工作液、模拟醋样的配制标准储备液：分别准确称取10mg儿茶素、表儿茶素标准品，用色谱级甲醇定容至10mL，得到浓度为1mgmL的母液；标准工作液：各量取500μL儿茶素和表儿茶素母液，用甲醇定容到10mL，得到儿茶素、表儿茶素质量浓度均为50μgmL混合标准溶液；用色谱级甲醇逐级稀释，得到质量浓度分别为0.1、0.2、0.5、5、10、20、50μgmL的混合标准品溶液；模拟醋样：测得山西老陈醋的pH值为3.42，故配制50mLpH为3.42乙酸溶液；准确移取500μL50μgmL混合标准溶液，加入2.00mLpH为3.42的乙酸溶液，配制成模拟醋样；步骤4，醋样前处理吸附：取2.5mL的模拟醋样和188mg步骤2活化后的XAD-2大孔吸附树脂，吸附11min；解析：吸附后，6000rpm离心5min后弃去上清溶液，加入400μL洗脱剂，涡旋20min进行解析；再次6000rpm离心5min，取上清液，过0.45μm有机滤膜后进行高效液相色谱分析；所述洗脱剂为四乙基氯化铵与正辛酸摩尔比为1:3的DES1；步骤5，标准曲线的建立将步骤3配制的各浓度混合标准品溶液依次按步骤4的方法进行前处理，然后采用步骤1确定的高效液相色谱条件进行检测，以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线，并分别确定两种黄烷醇类物质的线性回归方程，所述两种黄烷醇类物质的线性回归方程为：儿茶素：y=26.747x-9.338，R2＝0.9917，x的适用范围：0.5-50µgmL；表儿茶素：y=73.919x-37.145，R2＝0.9928，x的适用范围：0.2-50µgmL；其中：y为黄烷醇类物质所对应的峰面积，x为黄烷醇类物质的质量浓度，R2为线性相关性系数；步骤6，实际醋样检测取5种实际醋样用蒸馏水稀释10-20倍后按照步骤4方法进行前处理，后采用步骤1确定的高效液相色谱条件进行检测，测得样品中各组分的峰面积，以保留时间定性，根据步骤5确定的线性回归方程计算实际醋样中两种黄烷醇类物质儿茶素和表儿茶素的含量。

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