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申请/专利权人：西北农林科技大学
摘要：本发明涉及牛骨骼肌生成相关MEF2CmRNAm6A甲基化位点鉴定，根据m6A‑seq测序的结果，通过生物信息学分析确定MEF2CmRNA上m6A甲基化位点的准确位置，并通过m6A‑IP‑qPCR验证MEF2CmRNA的m6A水平在肌生成中的显著变化；通过m6A位点的同义点突变改变MEF2C的m6A甲基化水平，并影响MEF2C蛋白表达，证明了MEF2CmRNAm6A甲基化具有影响骨骼肌生成的功能；通过双荧光素酶报告系统和RIP实验证明MEF2C的表达受METTL3‑m6A‑YTHDF1轴的调控。为m6A甲基化修饰调控肌肉生长发育的功能研究提供参考，为肉牛的定向选育提供了新的分子标记。
主权项：1.一种与牛骨骼肌生成相关MEF2CmRNAm6A甲基化位点鉴定方法，根据m6A-seq测序结果分析得到的RNA片段中存在m6A甲基化位点，其特征在于：（1）根据哺乳动物中高度保守的RRACH序列进行MEF2CmRNA上m6A位点位置的确定；所述的RRACH序列中，R=G，A；H=A，C，U；（2）根据测序结果中的m6A甲基化位点在MEF2CmRNA上的位置，设计含有m6A位点的定量引物：MEF2C-m6A-F：5’-TCACCGGAACGAATTCCACT-3’MEF2C-m6A-R：5’-GCCCATCCTTCAGAGAGTCG-3’通过m6A免疫沉淀后的实时荧光定量PCR技术检测MEF2CmRNA的m6A甲基化水平在牛成肌细胞分化过程中的变化，验证m6A-seq测序的结果，证明MEF2CmRNA在Ensembl数据库中的序列号为ENSBTAT00000086206.1，MEF2CmRNAm6A甲基化位点位于ENSBTAT00000086206.1序列的第1248位核苷酸。
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百度查询： 西北农林科技大学 牛骨骼肌生成相关MEF2C mRNA m6A甲基化位点的鉴定和功能应用
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