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申请/专利权人：西南大学
摘要：本发明提供一种改良桑树DNJ生物合成的基因MnGutB1及其应用，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示。其编码的蛋白质氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。本发明通过构建过表达载体pZYGC‑MnGutB1在桑树中过表达MnGutB1，从而获得高丰度DNJ的桑树材料。通过构建病毒干涉载体pBinplus‑2mDNA1‑MnGutB1侵染桑树，获得低丰度DNJ桑树材料。本发明提供的基因表达对植物中DNJ含量调节变化显著，并且其过表达不影响桑树正常生长；其转化获得的桑树发根生长快速，可作为DNJ大规模植物生产的来源。
主权项：1.一种高丰度DNJ桑树毛根材料的制备方法，其特征在于：所述高丰度DNJ桑树毛根材料中过表达MnGutB1，所述基因MnGutB1的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；所述方法包括：1）将构建好的植物过表达载体pZYGC-MnGutB1转入发根农杆菌K599，采用针刺法，注射菌液至四叶期桑苗的子叶节处诱导产生转化毛状根；2）筛选出特异激发绿色荧光的转基因阳性发根；3）收获阳性株系发根，抽提所取材料的总RNA，反转录合成cDNA，分别采用MnGutB1基因特异引物进行RT-PCR检测，以MnRPL15作为内参基因；引物序列为：5'-GGCTATGTGATTTACCGTGTT-3'，5'-TTGGTCCAGTATGAGTTGAGAA-3'，反应条件为：94℃预变性4min；94℃变性15s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共24个循环；最后72℃延伸10min；筛选步骤2）中转基因阳性发根中MnGutB1基因表达水平相对空载转化显著提升；4）通过HPLC-MSMS进一步验证步骤3）获得的转基因阳性发根中DNJ的含量相对空载转化显著提升，获得高丰度DNJ的桑树毛根材料。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西南大学 一种改良桑树DNJ生物合成的基因MnGutB1及其应用
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