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申请/专利权人:山东大学
摘要:本发明公开了一种链霉菌来源的新型调控因子的编码基因,该基因命名为med‑ORF10,其核苷酸序列如SEQNo.1所示;同时还公开了对其基因进行的功能鉴定并利用该基因构建的med‑ORF10本源或异源表达工程菌株及其在促进抗生素生产中的应用。实验证实:本发明提供的调控因子具有正调控功能,在表达Med‑ORF10时,在不同菌株中都可以促进相应抗生素的生物合成水平,其应用有望为大量生产天然活性产物提高正效调控基因,在工业应用开发上具有重要价值。
主权项:1.一种med-ORF10的异源表达工程菌,其特征在于,所述异源表达工程菌其构建方法包括:1med-ORF10基因克隆;以链霉菌AM-7161总DNA为模板PCR扩增med-ORF10,引物序列如下:med10A-PIJ:GGAATTCCATATGTCCACCCACCGAGTC;med10B-PIJ:CGGGATCCGGTCACGATTCCGGCAGGTG;PCR产物med-ORF10的核苷酸序列如SEQNO.1所示; CATATG为NdeI酶切位点;GGATCC为BamHI酶切位点;PCR产物与表达载体pIJ8600通过双酶切后连接;2med-ORF10表达质粒导入Streptomycescoelicolor将酶切验证正确的质粒导入E.coliET12567pUZ8002;然后进行大肠杆菌ET12567pUZ8002med-ORF10与链霉菌S.coelicolorJ1501△VI-ORFA之间的属间接合转移;获得工程菌,命名为S.coelicolorJ1501△VI-ORFAmed-ORF10,其基因型为StreptomycescoelicolorΔVI-ORFA、actVI-ORFA缺失、pIJ8600携带med-ORF10整合插入基因组上、阿泊拉霉素抗性、硫链丝菌素诱导型启动子。
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权利要求:
百度查询: 山东大学 一种链霉菌来源的新型调控因子及其本源和异源表达工程菌株构建与应用
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