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申请/专利权人：复旦大学附属中山医院;中国人民解放军空军军医大学
摘要：本发明涉及疫苗制备方法领域，具体公开了SEOV的Gc区亚单位疫苗及其制备方法和应用，所述亚单位疫苗制备步骤为：分别提取汉滩病毒和汉城病毒M基因序列的共有序列，去除其中的滞留信号，分别表达不同长度的可溶性蛋白。通过在序列C段加HIS标签的方法，进行蛋白纯化，将合成好的基因克隆到表达载体中，转染S2细胞，筛选高表达株；然后批量成产，并通过蛋白携带的HIS标签进行蛋白纯化获得通用亚单位疫苗。本发明制备的亚单位疫苗稳定性好、易于纯化、不含病毒核酸成分，安全性较高，是一种可预防流行的汉坦病毒感染的通用疫苗。
主权项：1.汉城病毒包膜糖蛋白Gc区亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，共有序列设计：根据汉滩病毒和汉城病毒M基因高度同源性优势，运用生物信息学方法，获得1条汉滩病毒包膜糖蛋白共有序列，如SEQIDNO.1所示，获得1条汉城病毒包膜糖蛋白共有序列如SEQIDNO.2所示，然后，结合已知汉滩及汉城病毒包膜糖蛋白Gn和Gc的基因序列信息，去除其中的滞留信号TM，分别提取汉滩病毒和汉城病毒的Gn和Gc基因序列的共有序列；S2，目的基因重组质粒的构建：优化合并SEQIDNO.1-SEQIDNO.2所示的两条共有序列获得合并的包膜糖蛋白共有序列，以合并的包膜糖蛋白共有序列为模版，以SEQIDNO.11所示的SEOVGcF和SEQIDNO.12所示的SEOVGcR为引物，PCR扩增获得产物，将产物进行双酶切消化后与已酶切的S2细胞表达载体pMTBipV5-His-A连接，连接产物转化筛选获得目的基因重组质粒；S3，目的蛋白的表达、纯化：将重组质粒转染S2细胞，筛选阳性细胞，诱导蛋白表达，将稳定表达重组蛋白的S2细胞系扩大培养，诱导蛋白表达并纯化，获得通用亚单位疫苗。
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权利要求：
百度查询： 复旦大学附属中山医院 中国人民解放军空军军医大学 SEOV的Gc区亚单位疫苗及其制备方法和应用
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