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申请/专利权人：山东大学齐鲁医院
摘要：本发明公开了一种用于检测细胞缺氧状态和HIF1α蛋白活性的RCAN1.4启动子片段及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明采用双荧光素酶报告基因检测系统，将RCAN1.4‑315‑15启动子片段插入带有萤火虫荧光素酶报告基因的空白载体pGL3‑basic中，构建了表达萤火虫荧光素酶的重组质粒RCAN1.4‑315‑15‑LUC，通过检测RCAN1.4‑315‑15‑LUC荧光素酶活性，来判断RCAN1.4‑315‑15‑LUC启动子片段的激活情况，进而来判断细胞的缺氧状态和HIF1α蛋白活性。本发明提供的RCAN1.4‑315‑15启动子片段能够被HIF1α蛋白激活，且对HIF1α蛋白具有高度的敏感性，能够作为细胞缺氧和HIF1α蛋白活性指示剂。
主权项：1.一种利用双荧光素酶报告基因检测HIF1α蛋白表达变化的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将生长状态良好、处于对数生长期的HEK293细胞接种到48孔培养板中，37°C、5%C02饱和湿度培养箱中贴壁培养；S2、构建指示载体，所述指示载体为将核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的RCAN1.4-315-15启动子片段插入含有报告基因的空白载体pGL3-basic中得到的载体；S3、将指示载体转染入48孔培养板的HEK293细胞中，转染时细胞密度约为70-80%；S4、转染48小时后，将细胞进行或不进行缺氧处理，所述缺氧处理是指1%O2处理，检测指示载体中报告基因的表达变化，进而判断指示载体中RCAN1.4-315-15启动子片段的激活情况，从而判断HIF1α蛋白表达变化，所述报告基因的表达变化与HIF1α蛋白表达变化一致。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 山东大学齐鲁医院 用于细胞缺氧和HIF1α蛋白活性指示剂的RCAN1.4启动子片段及其应用
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