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申请/专利权人：金陵科技学院

摘要：本发明公开了一种苏崎茄同源四倍体植株花药培养方法，它包括适宜发育阶段的花蕾采集、花药培养前的花蕾预处理、花药预培养、胚状体诱导、胚状体萌发、壮苗和炼苗移栽等操作。与现有报道的二倍体茄子花药培养技术相比，本发明从苏崎茄同源四倍体植株的花药培养获得3个二倍单倍体，由于每个二倍单倍体植株来源于不同的独立胚状体，因此可以根据不同二倍单倍体植株之间的差异，或其自交后代分离情况，判断该四倍体植株基因型的纯合度，克服了在四倍体水平上自交鉴别该同源四倍体植株基因型纯合度时的困难，实现了二倍体苏崎茄品种花药培养的成功。

主权项：1.一种苏崎茄同源四倍体植株花药培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）采集四倍体茄子植株上的花蕾，将其放入塑料自封口袋中包好，并立即放入装有冰块的保温盒，将封口袋连同里面的花蕾放入4℃冰箱中低温处理2d至5d；（2）将步骤（1）中低温处理后的花蕾取出，剥去萼裂片，带入无菌室进行表面消毒；（3）取步骤（2）中的花蕾，在无菌条件下剥出完整的花药，接种到培养皿的预备培养基中，封口后放入35℃培养箱中黑暗条件下培养1-3d，然后取出放到25℃培养箱中光暗交替条件下继续培养15-30d；（4）将步骤（3）预备培养基中的花药转入胚状体诱导培养基中，同样的光暗交替条件下培养10-30d，直至出现胚状体；然后将胚状体及花药转入萌发培养基中，同样的条件下继续培养，待胚状体发育出完整的根和芽后，再转入壮苗培养基中，叶片无水渍化状态，株高达到2cm以上时，炼苗移栽；（5）将步骤（4）的生根壮苗用镊子轻轻夹出，洗掉根部所沾染的培养基，在多菌灵溶液中浸泡10-30min，取出后将根系用IBA或NAA溶液蘸一下，然后栽入未使用过的育苗基质中，浇透而不积水，用塑料薄膜覆盖苗盘，将苗盘放入以上光暗交替的培养箱中，7-15d逐步揭除薄膜，保持苗叶片不萎蔫并逐渐生长；步骤（1）中，采集茄子四倍体植株上花蕾，形态特征为柄端粗度大于花瓣端、花瓣筒与花萼筒基本齐平、花萼裂片稍分开的花蕾，此时花粉处于小孢子阶段，选取其中发育健壮、无病虫、花瓣包裹紧密的花蕾；步骤（2）中，消毒采用二步法，先将整理好的花蕾放入无菌三角瓶中，倒入70%-75%的酒精，深度没过花蕾，手摇或振荡1-5min，倒掉酒精；三角瓶中加入1-2滴吐温-80，再倒入6.5%的次氯酸钠溶液，手摇或振荡5-15min，然后倒掉次氯酸钠溶液，用无菌水冲洗3-5次，用灭菌的吸水纸或滤纸吸干花蕾表面的液体，瓶口盖封口膜备用；步骤（4）中，所述的萌发培养基为NLN或B5固体培养基添加0.1-1mgL的生长素、分裂素和赤霉素；所述的壮苗培养基为B5固体培养基，根据苗的生长状态，添加或不添加0.1-0.2mgL的生长素；步骤（5）中，所述的多菌灵溶液由有效成分含量为50wt%的多菌灵可湿性粉剂与水按照1:500~800的质量比稀释得到；将根部浸入多菌灵溶液，浸泡时间为10~20min；步骤（5）中，所述的IBA或NAA溶液的浓度为200~1000ppm，苗根部在溶液中的浸泡时间为1s~20min；所述的育苗基质为常见的蔬菜播种用的育苗基质，或者蛭石，厚度不小于8cm，浇透但不积水；根部插入基质而叶片露出基质，株行距为不低于5cm；步骤（5）中，塑料薄膜密封后1周内不打开薄膜，1周后可打开薄膜，拔除萎蔫死亡的植株，浇水或喷水后重新盖好薄膜，并逐渐留缝隙通风散湿，15天后全部揭掉薄膜，期间叶片出现萎蔫则向叶面喷施少量清水；步骤（3）中，所述的预备培养基为MS固体培养基添加0.1-2mgL的生长素和分裂素；步骤（4）中，所述的胚状体诱导培养基为NLN或B5固体培养基添加0.1-1mgL的生长素、细胞分裂素。

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