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申请/专利权人:浙江工业大学
摘要:本发明提供了一种应用于丝状真菌的单碱基编辑器及其构建方法。所述方法具体是以大肠杆菌‑真菌穿梭质粒pFC333为载体,将一种突变型nCas9‑HF蛋白与胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶糖基化酶抑制剂UGI进行融合,构建了一种高效的单碱基编辑器,可以高效的实现碱基从C到T的突变,有效拓宽了应用于丝状真菌的编辑工具。
主权项:1.一种单碱基编辑器构建方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一:将包含有胞嘧啶脱氨酶、nCas9蛋白、尿嘧啶糖基化酶抑制剂的单碱基编辑表达盒整合到pFC333质粒中,构建得到pFC333-pSCBE3-HF质粒;步骤二:将pFC333-pSCBE3-HF质粒中单碱基编辑表达盒内的nCas9蛋白替换为黑曲霉密码子优化nCas9蛋白,构建得到pFC333-CBE质粒;步骤三:对pFC333-CBE质粒中单碱基编辑表达盒内的黑曲霉密码子优化nCas9蛋白突变为nCas9-HF蛋白,构建得到pFC333-CBE-HF质粒,作为单碱基编辑器;其中,所述nCas9-HF蛋白是通过对黑曲霉密码子优化nCas9蛋白第497位、第661位、第695位、第926位中的至少一位氨基酸突变为Ala获得的。
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百度查询: 浙江工业大学 一种应用于丝状真菌的单碱基编辑器及其构建方法
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