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申请/专利权人：上海交通大学重庆研究院
摘要：本发明涉及生物工程技术领域，本发明提供了一种具有MS2.2‑crRNA结构的RNA编辑器及其制备方法和应用。本发明通过对crRNA颈环结构进行改造，插入RNA适配子MS2；此设计可以用于MCPMS2介导的类病毒virus‑likeparticle的mRNA包装体系，用来包装和递送Cas13X.1crRNA复合体，进而进行RNA敲除和编辑。克服了通常的RNA适配子结构会影响Cas13X.1的切割RNA活性的问题，经过本发明修饰的MS2‑crRNA，仍然保留有大部分hfCas13X.1介导的RNA降解活性。
主权项：1.一种具有MS2.2-crRNA结构的RNA编辑器的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：1以CMV-hfCas13X.1-U6-crRNA质粒为模板，用引物组合C13X-U6-Spe1-F和MS2.2-13XDR-R13进行扩增，得到PCR产物；2以PCR产物作为模板，用引物组合C13X-U6-Spe1-F和Mlu1-13XDR-MS2.2-R2进行扩增，得到MS2.2-C13XDR片段；3将MS2.2-C13XDR片段进行酶切，回收得到酶切产物1；4将CMV-hfCas13X.1-U6-crRNA质粒进行酶切，回收得到酶切产物2；5将酶切产物1和酶切产物2进行连接，得到CMV-hfCas13X.1-U6-MS2.2-crRNA质粒；步骤1中所述CMV-hfCas13X.1-U6-crRNA质粒的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述C13X-U6-Spe1-F的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述MS2.2-13XDR-R13的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；步骤2中所述Mlu1-13XDR-MS2.2-R2的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；步骤3中所述酶切所用的酶为SpeI和MluI内切酶；步骤4中所述酶切所用的酶为SpeI和MluI内切酶。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 上海交通大学重庆研究院 一种具有MS2.2-crRNA结构的RNA编辑器及其制备方法和应用
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