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申请/专利权人：深圳市国重生物科技有限公司
摘要：本发明提供了一种iPSC‑Car‑NK细胞的制备方法及应用，包括以下步骤：（1）将带有嵌合抗原受体CAR基因的慢病毒载体感染由血液细胞重编程得到的诱导性多能干细胞iPSC，得到表达嵌合抗原受体CAR的iPSC细胞；（2）将表达嵌合抗原受体CAR的iPSC细胞进行定向分化诱导，得到造血祖细胞HPC；（3）将造血祖细胞HPC转入无血清的DMEM培养基中；进行扩增，得到抗原特异性的IPSC‑CAR‑NK细胞。本发明通过以表达嵌合抗原受体CAR的iPSC细胞进行定向分化诱导，获得造血祖细胞HPC的基础上，利用的分化培养基，对造血祖细胞HPC的培养，诱导分化获得iPSC‑CAR‑NK细胞，并经过了对iPSC‑CAR‑NK细胞依次经过不同扩增培养，改善了iPSC‑CAR‑NK细胞具有优异癌细胞杀能力。
主权项：1.一种iPSC-Car-NK细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将带有嵌合抗原受体CAR基因的慢病毒载体感染由血液细胞重编程得到的诱导性多能干细胞iPSC，得到表达嵌合抗原受体CAR的iPSC细胞；（2）将表达嵌合抗原受体CAR的iPSC细胞在含有20-30ngml干细胞因子SCF、3-6μmmlGSK3β抑制剂、15-20ngml骨形态发生蛋白BMP、10-15μgLKGF、15-20μgLBMP-4、12-17μgLPDGF-AB、0.7-1.2mgLForskolin和3-8mgmlVEGF的培养基中培养，并添加10-14ngmlFLT-3L配体、20-25ngml血小板生成素TPO和10-20ngmlIL-2，进行定向分化诱导，得到造血祖细胞HPC；（3）将造血祖细胞HPC转入无血清的DMEM培养基中；每18h更换新培养基，培养6d；调整细胞密度1.3×102~1.7×102个mL，依次转入含有浓度为0.15-0.17gL氨甲环酸的第一扩增培养基和含有浓度为0.7-0.9gL的氨甲环酸第二扩增培养基中扩增；24h后更换相同扩增培养基；经过第一扩增培养基培养48h后转入第二扩增培养基，继续培养至72h，得到抗原特异性的IPSC-CAR-NK细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 深圳市国重生物科技有限公司 一种iPSC-Car-NK细胞的制备方法及应用
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