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申请/专利权人：南京瑞源生物技术有限公司
摘要：本发明公开了一种利用cre‑lox系统构建毕赤酵母菌株的方法，涉及微生物基因工程技术领域，具体包括以下步骤：S1、从毕赤酵母GS115基因组中分别扩增目的基因Ku70的上游1000bp序列P1、下游1000bp序列P3；S2、从质粒pPICZA‑Zeo‑Cre中扩增zeo抗性及Cre重组酶序列P2；S3、通过融合PCR将3片段P1、P2及P3整合到一起，本发明敲除毕赤酵母中参与非同源末端连接的关键基因ku70，通过阻断非同源末端连接的发生来提高基因组的精准编辑效率。通过诱导Cre酶的瞬时表达来回收zeo抗性筛选标记及cre重组酶序列，方便后续继续进行其他基因的编辑。
主权项：1.一种利用cre-lox系统构建毕赤酵母菌株的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、从毕赤酵母GS115基因组中分别扩增目的基因Ku70的上游1000bp序列P1、下游1000bp序列P3；S2、从质粒pPICZA-Zeo-Cre中扩增zeo抗性及Cre重组酶序列P2；S3、通过融合PCR将3片段P1、P2及P3整合到一起，P1及P2的重叠融合部分构成了lox71位点，P2及P3的重叠融合部分构成了lox66位点；S4、将融合片段通过电转化的方法导入毕赤酵母GS115中；S5、通过zeo抗性筛选转化子，PCR验证转化子是否整合到正确的位置；S6、甲醇诱导正确转化子中Cre重组酶的瞬时表达，启动lox位点间的重组；S7、表型筛选后通过PCR验证zeo抗性筛选标记及Cre重组酶序列是否正确切除。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京瑞源生物技术有限公司 一种利用cre-lox系统构建毕赤酵母菌株的方法
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