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申请/专利权人：东方慧医(山东)制药有限公司
摘要：本发明提供一种同源重组红曲霉菌基因簇控制桔青霉素的调控方法，涉及桔青霉素的调控技术领域。包括有基因筛选与定位、同源重组、基因编辑、基因表达调控、代谢工程以及筛选和优化，同源重组技术允许将完整的桔青霉素生产基因簇整体引入红曲霉菌中，这种方法能够确保桔青霉素合成途径中所有必需的基因都被转移，从而实现对生产过程的精准控制，通过将桔青霉素合成途径整合到红曲霉菌中，可以利用红曲霉菌优良的发酵特性和高产能力，提高桔青霉素的生产效率，红曲霉菌在发酵条件下生长迅速，并且通常能够产生大量的次级代谢产物，这对于桔青霉素的高效合成具有显著的优势，从而确保生产菌株的稳定性和一致性。
主权项：1.一种同源重组红曲霉菌基因簇控制桔青霉素的调控方法，其特征在于：包括有以下步骤：S1、基因筛选与定位：所述基因筛选与定位包括首先，通过分析确定红曲霉菌中控制桔青霉素合成的基因簇；这些基因包括编码酶、调节因子以及相关的调控序列和结构基因；S2、同源重组：使用分子生物学技术进行同源重组，将外源基因或修饰的基因片段导入红曲霉菌的基因组中；这些外源基因是桔青霉素合成途径中的关键基因，或者是与调控桔青霉素产量相关的基因；S3、基因编辑：利用CRISPRCas9基因编辑工具，精确地修改红曲霉菌的基因组，删除或增强特定基因的表达，这些编辑可以针对桔青霉素合成途径中的限速酶、调节因子或传递信号的基因进行；S4、基因表达调控：使用分子生物学技术进行同源重组，将外源基因或修饰的基因片段导入红曲霉菌的基因组中，这些外源基因是桔青霉素合成途径中的关键基因，或者是与调控桔青霉素产量相关的基因；S5、代谢工程：结合基因编辑和表达调控策略，通过代谢工程的方法优化红曲霉菌的代谢通路，使其更有效地转化为桔青霉素的前体和最终产物；S6、筛选和优化：对经过基因重组和代谢工程的菌株进行筛选和优化，选择产量高、稳定性好的菌株；这包括在实验室条件下的培养和分析，以验证和评估桔青霉素的产量和质量。
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