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申请/专利权人：北京化工大学
摘要：本发明公开了基于逆转录因子FadR构建脂肪酸辅酶A连接酶高通量筛选系统，属于合成生物学与蛋白质工程技术领域，通过FadR对胞内脂肪酸及脂肪酸酰基辅酶A的拮抗作用动态响应辅酶A连接酶的催化效率，经过调节FadR蛋白的表达水平优化筛选系统，应用于FadD的高通量筛选。主要步骤包括：筛选质粒的构建，宿主的优化；转录水平优化等手段，构建该高通量筛选系统的工作曲线应用于不同来源的FadD进行筛选，构建脂肪酸酯合成途径经发酵验证筛选系统准确性；对筛选出的最强FadD进一步进化，并应用所构荧光筛选系统进行高通量筛选；对优势突变体进行脂肪酸酯发酵产量检测，获得生物柴油产量的进一步提高。
主权项：1.基于逆转录因子FadR构建脂肪酸辅酶A连接酶高通量筛选系统，其特征在于，包括：构建含有fadR基因、fadR结合位点及报告基因的筛选质粒并电转化fadE缺陷型大肠杆菌；通过更探索不同强度的启动子及诱导剂浓度优化该筛选系统；通过荧光实验对不同来源的辅酶A连接酶进行筛选，构建脂肪酸从头合成途径经过发酵验证筛选系统准确性；通过易错pcr构建已筛选出最强的辅酶A连接突变文库；在96孔板中进行诱导表达，直接利用菌体进行高通量筛选；将突变文库连接到含有从头合成脂肪酸乙酯途径的质粒系统中，获得生物柴油产量的进一步提高。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京化工大学 基于逆转录因子FadR构建脂肪酸辅酶A连接酶高通量筛选系统
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