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申请/专利权人：高密同利制糖有限公司

摘要：本发明公开了一种应用于木糖生产的蛋白质和多肽的定量分析方法，它属于木糖生产的物料检测领域，包括以下步骤：对样品及时采集并调pH至碱性，用植物蛋白制备标准溶液，取标准溶液加入考马斯亮蓝G‑250溶液，充分混合均匀后静置3‑7分钟，在25‑35分钟内以含标准蛋白0μg的标准溶液为空白对照，在595nm处测定吸光度，以标准溶液中标准蛋白浓度与其相应的吸光度绘制标准曲线，线性回归方程的相关系数不低于0.99，配置考马斯亮蓝G‑250溶液的空白液，取处理后的样品分别加入考马斯亮蓝G‑250溶液、考马斯亮蓝G‑250溶液的空白液，得吸光度A2和A1，将A2‑A1代入线性回归方程，计算样品中蛋白质和多肽的浓度。本发明灵敏度高，操作简单，可以准确检测样品中蛋白质和多肽的浓度。

主权项：1.一种应用于木糖生产的蛋白质和多肽的定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品采集及预处理：样品为木糖水解液或脱色液；木糖水解液的采集及预处理：采集80-95℃的木糖水解液，用质量分数5-15%的无机碱溶液迅速稀释；脱色液的采集及预处理：采集65-95℃的脱色液，用0.22μm过滤器过滤，然后用质量分数5-15%的无机碱溶液迅速稀释；木糖水解液或脱色液稀释后pH为13.2-13.8，然后密封保存；（2）标准溶液的制备：取不同体积标准蛋白溶液，分别加入磷酸缓冲液稀释成每毫升含标准蛋白0μg、200μg、400μg、600μg、800μg和1000μg的标准溶液；（3）标准曲线的绘制：分别量取含标准蛋白0μg、200μg、400μg、600μg、800μg和1000μg的标准溶液于不同的试管中，分别向不同的试管中加入考马斯亮蓝G-250溶液，充分混合均匀后静置3-7分钟，在25-35分钟内以含标准蛋白0μg的标准溶液为空白对照，在570-610nm处测定吸光度，以标准溶液中标准蛋白浓度为纵坐标，其相应的吸光度为横坐标绘制标准曲线，线性回归方程的相关系数不低于0.99；（4）测定方法：将体积分数95%的乙醇和85%的磷酸溶液混合，加超纯水定容，配置成考马斯亮蓝G-250溶液的空白液；准确量取预处理后的样品，加入考马斯亮蓝G-250溶液的空白液，充分混合均匀后静置3-7分钟，25-35分钟内以含标准蛋白0μg的标准溶液为空白对照，在570-610nm处测定吸光度，所得吸光度记为A1；准确量取预处理后的样品，加入考马斯亮蓝G-250溶液，充分混合均匀后静置3-7分钟，25-35分钟内以含标准蛋白0μg的标准溶液为空白对照，在570-610nm处测定吸光度，所得吸光度记为A2；将A2-A1的数值代入线性回归方程，得稀释后样品中蛋白质和多肽的浓度C测，实际样品中蛋白质和多肽的浓度C0由式1获得，n为样品稀释倍数； 式1；所述样品稀释倍数n为1.103-1.415倍，稀释倍数n按式2计算： 式2；其中，V1为采集样品时的体积，单位为mL，为温度校正系数，，为采集样品时所处温度下水的密度，单位为gcm3，为无机碱溶液所处温度下水的密度，单位为gcm3，V2为无机碱溶液的体积，单位为mL；所述步骤（2）中的标准蛋白为谷蛋白、玉米醇溶蛋白和球蛋白中的任一种；所述85%的磷酸溶液为每毫升磷酸溶液中含有0.85g磷酸。

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