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申请/专利权人：黑龙江大学

摘要：一株融合魏斯氏菌（Weissellaconfusa）JCM11，体外益生特性及降胆固醇能力。本发明涉及微生物领域，旨在从犊牛肠道中分离的株菌中筛选出降胆固醇效果最好的菌株，并对其体外益生特性进行评价。融合魏斯氏菌JCM11具有高效降胆固醇效果，并且具有BSH活力。对其进行有害代谢物检测、抗生素敏感性试验以及抑菌实验测定安全性，表现为无色氨酸生成、不产生硝酸盐还原酶、不产生明胶酶并且不溶血，对抗生素敏感或中度敏感，且对指示菌均有抑菌能力。最后进行耐酸、耐胆盐、模拟胃肠道耐受性实验和粘附能力实验测定体外益生特性。表现为耐受pH2～4.5和0.1～0.3%胆盐环境，模拟胃肠道后的存活率为87.19%，其疏水性为14.56%、自聚性为20.49%、与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的共聚性为14.62%和17.25%。

主权项：1.一种具有降胆固醇能力的融合魏斯氏菌JCM11的体外益生特性评价，其特征在于它按以下步骤实现：所有的样本均由黑龙江省某牧场提供，2023年7月31日在牧场中随机挑选新出生的健康状况良好的娟姗及娟姗-和牛杂交牛犊牛各6头，在其出生后采集其胎粪和吃初乳后的粪便样本，共24份，在无菌条件下准确称取娟姗与娟姗-和牛杂交犊牛新鲜粪便1g，加入到装有PBS的离心管中，此时为原菌液;用PBS对原菌液进行10-1至10-10梯度稀释，标记好浓度；分别取100μL各浓度菌液涂布于MRS琼脂平板上，倒置于恒温微生物培养箱37℃培养24～48h；培养到长出单菌落后，挑取生长状态良好、表征（颜色、大小、形状）的菌落，在MRS固体培养基平板上划线接种，37℃培养24h；挑取培养出的单菌落继续连续培养三代进行纯化，最终获得MRS琼脂平板中生长的纯菌落；用接种环分别挑取已经获得的纯菌落接种于30mLMRS液体培养基中，放入摇床120r37℃扩大培养20h，得到单菌悬液，将得到的单菌悬液进行分子生物学鉴定，将分离得到的菌株进行甘油保藏；将甘油保藏的菌株活化，在超净台中将其无菌接种在灭菌MRS培养基中，在37℃恒温培养箱中培养24h，重复上述步骤3次，使菌株充分活化；将充分活化后的菌液接种在CHOL-MRS培养基中，37℃恒温培养箱中培养24h，以测定其降胆固醇能力，选择降胆固醇效果最好的融合魏斯氏菌JCM11进行下一步实验；将充分活化后的菌液接种在加牛磺脱氧胆酸钠的MRS培养基中，37℃恒温培养箱中培养24h，以测定融合魏斯氏菌JCM11的产BSH能力；将充分活化后的菌液接种在MRS液体培养基中，37℃恒温培养箱中培养24h，测定融合魏斯氏菌JCM11生长曲线及pH值；将充分活化后的菌液接种在硝酸盐培养基中，37℃恒温培养箱中静置培养48h，进行融合魏斯氏菌JCM11硝酸还原酶检测；将充分活化后的菌液接种在蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养箱中静置培养48h，进行融合魏斯氏菌JCM11吲哚实验；将充分活化后的菌液涂布在哥伦比亚血琼脂平板上，37℃孵育48h，进行融合魏斯氏菌JCM11溶血实验；将充分活化后的菌液接种在明胶生化管中，37℃恒温培养箱中静置培养48h，进行融合魏斯氏菌JCM11明胶液化实验；将充分活化后的菌液涂布在MRS琼脂培养基上，然后将抗生素纸片置于培养基表面，进行融合魏斯氏菌JCM11抗生素敏感性试验将指示菌充分活化后接种到LB液体培养基中，将充分活化后的唾液联合乳杆菌接种到MRS液体培养基中37℃分别培养24h后，进行融合魏斯氏菌JCM11抑菌实验；将充分活化后的菌液接种在不同pH的MRS液体培养基中，37℃恒温培养箱中培养3h，进行融合魏斯氏菌JCM11耐酸实验；将充分活化后的菌液接种在不同胆盐浓度的MRS液体培养基中，37℃恒温培养箱中培养3h，进行融合魏斯氏菌JCM11耐胆盐实验；将充分活化后的菌液离心，将离心后得到的菌泥在PBS中重悬，进行融合魏斯氏菌JCM11模拟胃肠道实验；将充分活化后的菌液离心，将离心后得到的菌泥在PBS中重悬，与乙酸乙酯孵育3h，进行融合魏斯氏菌JCM11疏水性实验；将充分活化后的菌液离心，将离心后得到的菌泥在PBS中重悬，在37℃下将悬浮液孵育5h，进行融合魏斯氏菌JCM11自聚性实验；将充分活化后的菌液离心，将离心后得到的菌泥在PBS中重悬，与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别在37℃培养5h，进行融合魏斯氏菌JCM11共聚性实验。

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