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申请/专利权人：河络新图生物科技(上海)有限公司
摘要：本发明提供一种通过体外细胞培养体系制备血小板的方法。该方法涉及分离纯化人脐带血，进而得到人类造血干细胞亞群CD34+，将CD34+造血干细胞扩增培养后，置于分化培养基培获得巨核细胞的最高产量，其后将培养基置换为成熟培养基，6‑12天后收集血小板并进行功能检测。本发明可以得到高纯度的CD34+造血干细胞，有助于下游巨核细胞的分化；使用优化的培养基，可以得到高产量与纯度的巨核细胞，进而提高血小板分化效率，得到更多的血小板。
主权项：1.一种体外制备血小板的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）分离纯化血液样本中的干细胞；2）于巨核细胞分化培养基中培养，按照每2mL分化培养基加入5×105个细胞的比例将干细胞种于低吸附6孔板中，于37摄氏度，5％CO2下培养，每2-3天换液一次，每次更换34的新鲜分化培养基；其中，所述巨核细胞分化培养基包含SFEM培养基、100ngmL人血小板生成素、50ngmL干细胞因子；3）更换血小板成熟培养基后，将细胞放置于50mL离心管中，总培养体系20mL，加入搅拌桨对细胞进行搅拌培养，搅拌速度100rpm，37摄氏度，5%CO2，其中搅拌桨为十字形搅拌桨、4叶、叶宽0.8cm；或：更换为血小板成熟培养基，将细胞放置于水平摇床上进行摇震培养，转速90rpm，37摄氏度，5％CO2；其中，所述血小板成熟培养基包含IMDM培养基、1×胰岛素-转铁蛋白-硒、1×谷氨酰胺、0.45mM硫代甘油、50µgmL抗坏血酸、15%FBS、1×青链霉素、10UmL肝素、50ngmL人血小板生成素、10µMY-27632、15µMKP-457、0.75µMSR-1；4）在更换血小板成熟培养基6-12天后收集成熟的血小板。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 河络新图生物科技(上海)有限公司 一种体外制备血小板的方法及其培养基
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