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一种DNA钠盐与抗菌肽复合物的制备方法 

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申请/专利权人:瑞吉明(山东)生物科技有限公司

摘要:本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及一种DNA钠盐与抗菌肽复合物的制备方法。包括以下步骤:预成膜溶液的制备;抗菌肽的提取纯化与修饰;锈病菌DNA的提取及与伊枯草菌素‑锌螯合物的复合。本发明通过制备PDA修饰的伊枯草菌素,使PDA包覆在纯化伊枯草菌素表面,对纯化伊枯草菌素进行保护,增加伊枯草菌素的稳定性,防止其在存储和使用过程中降解,从而延长其有效期,并通过在伊枯草菌素‑锌螯合物表面再包覆一层锈病菌DNA钠盐,使锈病菌DNA钠盐可以与锈病菌进行特异性结合,起到靶向作用,制得的DNA钠盐与抗菌肽复合物能够更有效地作用于目标病菌,增强抗菌能力。

主权项:1.一种DNA钠盐与抗菌肽复合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:S1:预成膜溶液的制备将壳聚糖与去离子水混合均匀,然后加入盐酸溶液调节成6-8wt%的壳聚糖溶液,通入氮气去氧,再加入2-巯基丙酸密封振荡,静置后在去离子水中透析,得到羧基修饰壳聚糖溶液,将Tris-盐酸缓冲液与无水乙醇混合均匀,然后加入羧基修饰壳聚糖溶液搅拌,再进行超声分散,然后加入多巴胺,置于黑暗中搅拌并在黑暗中进行保存,得到预成膜溶液;S2:抗菌肽的提取纯化与修饰将解淀粉芽孢杆菌培养出单个菌落后在种子培养基中进行振荡培养,得到发酵液,将发酵液离心后抽滤得到上清液,然后过滤并调节pH,在1-4℃下静置过夜后离心抽滤得到沉淀Ⅰ,将沉淀Ⅰ与超纯水混合后继续进行离心抽滤,重复多次后进行真空冷冻干燥,置于低温下保存,得到纯化伊枯草菌素,将纯化伊枯草菌素和预成膜溶液混合并进行高速搅拌,调节pH后冲洗,得到PDA修饰的伊枯草菌素;S3:锈病菌DNA的提取及与伊枯草菌素-锌螯合物的复合取感染锈病的麦株,切下感染部位并置于液氮中快速冷冻,研磨成细粉并通过CTAB法提取得到锈病菌DNA,将PDA修饰的伊枯草菌素与去离子水混合,调节pH后加入ZnSO4·4H2O,恒温水浴加热后置于无水乙醇中沉淀,过滤得到沉淀Ⅱ,将沉淀Ⅱ烘干得到伊枯草菌素-锌螯合物,将锈病菌DNA、伊枯草菌素-锌螯合物和醋酸钠溶液混合均匀,静置离心后抽滤得到沉淀Ⅲ,再用冷乙醇洗涤,烘干冷却得到DNA钠盐与抗菌肽复合物。

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