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一种生产、纯化RSPO1细胞因子方法 

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申请/专利权人:深圳贝蒂斯生物科技有限公司

摘要:本申请提供一种生产RSPO1细胞因子的方法,该方法包括:培养过表达RSPO1细胞因子的稳转细胞系。本发明具备以下优点:本发明以PCDNA3.1为真核表达载体构建的,突破传统病毒载体构建的方法,在非病毒培养的实验室环境下就可以操作,操作简便、安全、生产周期短。本发明中生产的RSPO1蛋白不是融合蛋白保证了RSPO1蛋白分子量的稳定,本发明中生产的RSPO1蛋白经过两步纯化后,获得RSPO1蛋白浓度更高纯度更大。

主权项:1.一种生产RSPO1细胞因子的方法,其特征在于,该方法包括:培养过表达RSPO1细胞因子的稳转细胞系;所述方法包括将编码RSPO1细胞因子的序列克隆入真核表达载体,形成重组真核表达载体;重组真核表达载体转入宿主细胞中,形成稳转细胞系;所述真核表达载体为pcDNA3.1;所述宿主细胞为HEK293细胞;所述RSPO1细胞因子的C端连接标签蛋白;所述标签蛋白为3xFLAG标签;培养过表达RSPO1细胞因子的稳转细胞系的方法包括:基础培养、加压培养、扩大培养和蛋白表达培养;加压培养所用的培养基为选择培养基;所述选择培养基中含有抗性筛选试剂;所述蛋白表达培养所用的培养基为表达培养基,所述表达培养基中不含有蛋白质;所述基础培养基和扩大培养基中均不含有抗性筛选试剂;所述抗性筛选试剂为G418;所述方法还包括纯化RSPO1细胞因子;所述纯化方法包括超滤法和通过flag标签纯化;优选的,所述超滤法所用的滤膜孔径为10kD。

全文数据:

权利要求:

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