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申请/专利权人：重庆市中药研究院
摘要：本发明公开了一种冬虫夏草菌侵染成功的标志性产物的鉴定方法，包括以下步骤：步骤一、寄主接菌；步骤二、代谢物提取；步骤三、上机检测；步骤四、代谢物定性定量；步骤五、对结果的分析。该方法操作简单，灵敏度和准确率高，鉴定冬虫夏草菌侵染成功的标志性产物，是冬虫夏草菌是否侵染成功的重要参考和依据，利于虫草类药材培育效率的早期评价。
主权项：1.一种冬虫夏草菌侵染成功的标志性产物的鉴定方法，其特征是：包括以下步骤：步骤一、寄主接菌；待幼虫长至4龄期后接种冬虫夏草菌，饲养1月后开始检查感菌效果，并将幼虫划分为感菌虫与非感菌虫；步骤二、代谢物提取；1称取虫体腹部内腔组织200mg样本，加入500μL含有内标的提取液，涡旋混匀30秒；2冰水浴超声10min；3零下20℃静置1小时；4将样本4℃，12000rpm离心15min；5取出500μL上清于EP管中；6在真空浓缩器中干燥提取物；7向干燥后的代谢物加入160μL复溶提取液；8涡旋30秒，冰水浴超声10分钟；9将样本4℃，12000rpm离心15min；10取出120μL上清于2mL进样瓶，每个样本各取10μL混合成QC样本上机检测；步骤三、上机检测；用于代谢组学分析的液质联用系统由沃特世AcquityI-ClassPLUS超高效液相色谱串联沃特世XevoG2-XSQTOF高分辨质谱仪组成，所使用色谱柱为购自沃特世的AcquityUPLCHSST3色谱柱；步骤四、代谢物定性定量；使用MassLynxV4.2采集的原始数据由ProgenesisQI软件进行峰提取、峰比对等数据处理操作，基于ProgenesisQI软件在线METLIN数据库和Biomark数据库进行鉴定，同时理论片段鉴定和质量数偏差均在100ppm以内；步骤五、对结果的分析；1对比感菌虫与非感菌虫虫体内代谢物差异；2对检测获得主要差异代谢物进行KEGG数据注释；3对ABC转运蛋白通路中的标志性差异物质含量进行比较；4对于其它批次的感菌虫、非感菌虫进行代谢物检测。
全文数据：
权利要求：
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