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申请/专利权人：天津大学浙江研究院(绍兴)
摘要：本发明公开了无痕基因整合的乳酸乳球菌及构建方法，步骤为：将乳酸乳球菌基因整合位点上游同源臂、待整合基因X和下游同源臂连接在质粒骨架pSynUC57上，得到质粒pSynUC57‑INX，并电转入乳酸乳球菌获得一次重组菌1；制备质粒pNZts‑PnisA‑I‑sceI；并电转入一次重组菌1，获得一次重组菌2；添加nisin诱导I‑sceI表达，通过菌落PCR筛选二次重组菌，即含有温敏质粒pNZts‑PnisA‑I‑sceI的无痕基因整合菌；高温培养消除温敏质粒，得到无痕基因整合的乳酸乳球菌；本发明无需提前敲除基因以获得缺陷型菌株；操作简单，只需要使用菌株常用培养基，无痕基因整合效率超过90％。
主权项：1.无痕基因整合的乳酸乳球菌的构建方法，其特征在于包括如下步骤：1将乳酸乳球菌基因整合位点上游同源臂、待整合基因X和乳酸乳球菌基因整合位点下游同源臂连接在质粒骨架pSynUC57上，得到质粒pSynUC57-INX；2将PnisA启动子与反向筛选标记基因I-sceI连接在质粒骨架pNZts上，得到质粒pNZts-PnisA-I-sceI；3将质粒pSynUC57-INX电转入乳酸乳球菌获得一次重组菌1；4将质粒pNZts-PnisA-I-sceI电转入一次重组菌1，获得一次重组菌2；5向一次重组菌2中添加nisin诱导I-sceI表达，通过菌落PCR筛选二次重组菌，即含有温敏质粒pNZts-PnisA-I-sceI的无痕基因整合菌；6通过提高温度培养消除温敏质粒pNZts-PnisA-I-sceI，得到无痕基因整合的乳酸乳球菌；所述反向筛选标记基因I-SceI为编码I-SceI蛋白的核苷酸序列，所述I-SceI蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；所述PnisA启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 天津大学浙江研究院(绍兴) 无痕基因整合的乳酸乳球菌及构建方法
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