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申请/专利权人：上海赛伦生物技术股份有限公司

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体地说是一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法。一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：具体方法如下：鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；毒素进行甲醛灭活脱毒处理；进行动物免疫；免疫后采血；保存；SD病毒灭活处理；将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；进行超滤；将超滤后的血浆混合物进行DEAE凝胶柱层析处理；将F（ab’）2免疫球蛋白抗体加入适量的NaCl和间甲酚的溶液中；将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤，分装。同现有技术相比，制备出来的胡蜂毒素抗毒血清对七里蜂，凹纹胡蜂，黑腹虎头蜂等不同胡蜂种类，云南大理胡蜂，陕西安康胡蜂等不同地域的胡蜂的毒素具有有效的中和效果。

主权项：1.一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：具体方法如下：1鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；2将黑腹虎头蜂毒素进行甲醛灭活脱毒处理；3将甲醛灭活脱毒处理后的黑腹虎头蜂毒素进行动物免疫；4免疫后采血；5采完的血浆置2～8℃的冷库中保存，保存5年；6将血浆进行SD病毒灭活处理；7将灭活处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；8将板框压滤后的血浆混合物中添加1.5～2倍的蒸馏水进行血浆稀释；9将稀释后的血浆混合物进行胃酶消化处理；10将胃酶消化处理后的血浆混合物进行第一次沉淀处理；11将第一次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；12将板框压滤处理后的血浆混合物进行第二次沉淀处理；13将第二次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并收集沉淀物，弃上清；14将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；15将明矾吸附处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；16将板框压滤处理后的血浆混合物加入3倍纯化水进行超滤；17将超滤后的血浆混合物进行DEAE凝胶柱层析处理，纳米膜过滤，制得Fab’2免疫球蛋白抗体；18将Fab’2免疫球蛋白抗体加入适量的NaCl和间甲酚的溶液中，并调整PH值至6～7制得胡蜂毒素抗毒血清原液；19将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤，分装；所述的步骤1中黑腹虎头蜂的鉴定方法如下：1a将0.2g未知胡蜂毒加2ml的DDH2O进行溶解，3000g离心5min，弃上清；1b加入200ul的LB2，充分混匀，悬浮沉淀；1c加入20ul的RNaseA于步骤1b的样品中在室温孵育2min；1d加入20ul的PK，涡旋混匀，在室温中孵育2min；1e加入500ul的BB2，立即涡旋5s，再室温中孵育10min；1f将全部溶液加入离心柱中，12000rpm离心30s，弃去流出液；1g加入500ul的CB2，12000rpm离心30s，弃废液；1h重复步骤1g一次；1i加入500ul的WB2，使用前检查有无无水乙醇，12000rpm离心30s，弃废液；1j重复步骤1i一次；1k12000rpm离心2min，彻底去除残留的WB2；1l将离心柱置于干净的离心管中，在柱中央加入100ul预热的EB，或去离子水，室温静置1min，12000rpm离心1min，洗脱DNA，洗脱的DNA于-20℃保存；1m采用通用引物以及特异性引物从胡蜂DNA核酸序列上PCR扩增出COI序列的片段，再经过二代测序测出COI片段的序列，经NCBI网站比对出胡蜂物种；所述的步骤5中SD病毒灭活处理的具体流程为：5a将血浆中加入1％的TritonX-100、0.3％的TNBP，在25℃的温度下静置6小时；5b在静置6小时后的血浆混合物中添加0.074％的硅藻土；所述的步骤6中板框压滤的滤液在4℃的温度下静置过夜处理；所述的步骤8中胃酶消化处理的具体流程为：8a在血浆混合物中添加胃酶，并在温度为30℃、PH值为3.2的环境下消化45～90分钟；8b经消化后的血浆混合物中添加150gL的硫酸铵，搅拌溶解；8c调整PH值至5.2～5.4，并加温至56～58℃维持30分钟；所述的步骤9中第一次沉淀处理的具体流程为：降温至45℃以下，并加入5～10gL的硅藻土；所述的步骤11中第二次沉淀处理的具体流程为：11a加入200gL的硫酸铵，调整PH值至7.0～7.4，搅拌溶解；11b加入5～10gL的硅藻土，静置30～60分钟；所述的步骤13中明矾吸附处理的具体流程为：13a在35℃的温度下，按血浆沉淀物量的2～4倍重量加纯化水溶解；13b加0.8％的明矾，并调整PH值至7.7～7.9，搅拌60分。

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