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申请/专利权人：中山大学附属第一医院

摘要：本发明提供了一种基于同步辐射圆二色谱光谱学研究生物大分子结构的方法及其应用。本发明首次通过同步辐射实验室真空紫外圆二色实验站分析抗HER2单克隆抗体与HER2的结构变化，并开创性地发现，单克隆抗体的加入会明显改变HER2蛋白的二级结构，呈现出以α‑螺旋和β‑折叠的显著性增加，转角结构的显著性降低为特点。亲和力越高的单克隆抗体越发引起HER2蛋白α‑螺旋和β‑折叠二级结构的急剧性改变。因此可以通过基于同步辐射圆二色谱光谱学研究单克隆抗体与抗原结合大分子的结构组成用于辅助筛选高亲和力活性的单克隆抗体。

主权项：1.一种基于同步辐射圆二色谱光谱学研究生物大分子结构的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1采用NaH2PO4Na2HPO4缓冲液溶解HER2蛋白；2向步骤1中加入不同的抗HER2单克隆抗体作为实验组，加入等体积的蒸馏水作为空白对照组；3待步骤2充分混匀后，静置30min；然后向0.2mm光程石英样品池中加入1mL上述混合液，并将其置于同步辐射实验室真空紫外圆二色实验站进行SRCD分析，并将结果经数据处理后，统计蛋白二级结构参数；其中，所述的抗HER2单克隆抗体是选自以下的抗体类型，HER2-AB-1：轻链可变区氨基酸序列DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCLCNVKQYICMLWYQQKPGKAPKLLIYQAEDNSRGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQGTLISGERFGQGTKVEIKR、重链可变区氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSICYTLWVKQAPGKGLEWIGSNCWAYLKFSVNMDFNKKATLSRDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRIMFTACKLFYRDWGQGTLVTVSSAS；HER2-AB-2：轻链可变区氨基酸序列DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCYCCSGMDNANSWYQQKPGKAPKLLIYPGNSPDSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQRAFDKRSEFGQGTKVEIKR、重链可变区氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGDVINWVKQAPGKGLEWIGYCKAPDIKGWCWVVWDFKATLSRDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRDRYFPMYGEPQHWGQGTLVTVSSAS；HER2-AB-3：轻链可变区氨基酸序列DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCFIVFYMQTNSMWYQQKPGKAPKLLIYNTCHRGVGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQTYHSYHYAFGQGTKVEIKR、重链可变区氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSCISRNWVKQAPGKGLEWIGAHNPGQPDHMDFEYMCLKATLSRDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRSARFDKPVPQGAWGQGTLVTVSSAS；HER2-AB-4：轻链可变区氨基酸序列DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCDGWQRMSCAHTWYQQKPGKAPKLLIYKWMFVPPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQNRRDEVIRFGQGTKVEIKR、重链可变区氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSCGHPVWVKQAPGKGLEWIGWDLQKKRLMLVIDNHRSKATLSRDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRCTTMCWICLQLIWGQGTLVTVSSAS；HER2-AB-5：轻链可变区氨基酸序列DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCMTCVLLTEHAGWYQQKPGKAPKLLIYYGLIPYGGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYFCQDKKMHPNKFGQGTKVEIKR、重链可变区氨基酸序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSYAPRQWVKQAPGKGLEWIGGISFEAGPTNFCTNLFPKATLSRDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRADMRSYPLTQGPWGQGTLVTVSSAS；所述抗HER2单克隆抗体对HER2蛋白的亲和力与其二级结构参数相关，抗HER2单克隆抗体对HER2蛋白的亲和力越高，蛋白二级结构中的α-螺旋和β-折叠占比就越高，转角结构占比就越低。

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