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内标量化靶核酸序列方法、内标、引物探针组及试剂盒 

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申请/专利权人:苏州天隆生物科技有限公司

摘要:本发明公开了一种内标量化靶核酸序列方法、内标、引物探针组及试剂盒,其中试剂盒包含用于扩增靶核酸序列的一对靶标引物组成的靶标引物对和靶标探针;和用于扩增内标的一对内标引物组成的内标引物对和内标探针,所述靶标引物对与所述内标引物对中存在一条共用的引物序列为共用引物,在所述靶标引物对和所述内标引物对中与共用引物在核酸序列5’至3’方向上下游关系不同的另外一条靶标引物和内标引物的引物序列是不同的,所述靶标探针和所述内标探针序列也不同,如此在内标体系中既能保证内标对于靶标扩增动力学特性的最大限度模拟,又不至于因为竞争使得在高浓度差异环境中两者竞争影响产生过大扩增差异而导致内标定量不准的问题。

主权项:1.一种内标量化靶核酸序列方法,其特征在于,包含:1从生物样品中提取靶核酸序列获得提取液,其中所述靶核酸序列包含mRNA转录物和或内源基因组DNA;2所述提取液与包含内标的试剂接触形成扩增体系液,其中所述扩增体系液包含用于扩增所述靶核酸序列的一对靶标引物组成的靶标引物对和靶标探针,以及用于扩增所述内标的一对内标引物组成的内标引物对和内标探针;所述靶标引物对与所述内标引物对中存在一条共用的引物序列,该引物序列记为共用引物;沿核酸序列5’至3’的方向,在靶标引物对和内标引物对中,与共用引物上下游关系不同的另外一条靶标引物和内标引物,两者的引物序列不同,所述靶标探针和所述内标探针的核酸序列不同;3使所述扩增体系液进行扩增反应;4获得反映所述扩增体系液中内标和靶标对应于扩增产物量的荧光特性;5通过使用已知量的内标荧光特性和靶核酸序列的荧光特性确定所述生物样品中靶核酸序列的初始量。

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