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一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法 

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申请/专利权人:华中农业大学

摘要:本发明公开了一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法,该方法包含:将含有TRV2‑CpCHLD载体的重组质粒转入农杆菌GV3101中,用含有卡那霉素和利福平的LB液体培养基分别对含有TRV2‑CpCHLD或TRV1的农杆菌进行过夜活化培养,之后离心收集菌体,弃上清液后重悬菌体;将TRV2‑CpCHLD重悬菌液与TRV1重悬菌液混合,于室温、避光下静置,最后注入蜡梅子叶、幼叶和成熟叶的背面刻伤处。本发明解决了现有技术未曾在蜡梅中实现VIGS高效基因沉默的问题,首次实现VIGS技术在蜡梅中的应用,用于注射侵染的最佳器官是蜡梅子叶,用于注射侵染的农杆菌菌液最佳OD600为1.2~1.5。

主权项:1.一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法,其特征在于,该方法包含:1将TRV2-CpCHLD载体转入大肠杆菌的感受态中,挑取阳性菌株,经PCR鉴定,提取含有TRV2-CpCHLD载体的重组质粒,将含有TRV2-CpCHLD载体的重组质粒转入农杆菌GV3101中,得到含有TRV2-CpCHLD的农杆菌GV3101;2将含有TRV1的农杆菌GV3101和TRV2-CpCHLD的农杆菌GV3101分别接种到含卡那霉素和利福平的LB液体培养基上,于28℃、200r·min-1下活化培养,于20℃离心收集菌体,弃上清液后用重悬液重悬菌体,分别得到含有TRV1的重悬菌液和含有TRV2-CpCHLD的重悬菌液;3将含有TRV1的重悬菌液和含有TRV2-CpCHLD的重悬菌液混合,于室温、避光下静置得到注射液;在蜡梅的子叶、幼叶和成熟叶的背面划出伤口,在伤口处将注射液注入,先置于避光、室温下培养,再置于20~25℃培养。

全文数据:

权利要求:

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