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申请/专利权人：微元合成生物技术(北京)有限公司

摘要：本发明公开了重组酵母菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明要解决的技术问题如何以甲醇为原料制备1,3丙二醇，未解决该技术问题，本发明提供了以甲醇为底物制备1,3丙二醇的重组酵母菌。所述重组酵母菌中存在以下代谢途径：a将甲醇转化为甲醛；b由甲醛和D‑木酮糖5‑磷酸合成3‑磷酸甘油醛和二羟基丙酮；c将二羟基丙酮转化为磷酸二羟基丙酮或将3‑磷酸甘油醛转化为磷酸二羟基丙酮；d将磷酸二羟基丙酮转化为甘油3磷酸；e将甘油3磷酸转化为甘油；f将甘油转化为3‑羟基丙醛；g将3‑羟基丙醛转化为1,3丙二醇。所述重组菌还存在加强的木酮糖5‑磷酸合成途径。

主权项：1.一种重组菌，其特征在于：所述重组菌通过对作为受体菌的酵母菌进行以下操作制备获得，所述酵母菌为多形汉逊酵母或巴斯德毕赤酵母，S1）向所述受体菌中导入来源于酿酒酵母的磷酸二羟基丙酮还原酶基因；S2）向所述受体菌中导入来源于酿酒酵母的3-磷酸甘油磷酸酶基因；S3）向所述受体菌中导入来源于肺炎克雷伯氏菌的甘油脱水酶基因，所述甘油脱水酶为甘油脱水酶DhaB1、甘油脱水酶DhaB2和甘油脱水酶DhaB3；S4）向所述受体菌中导入来源于肺炎克雷伯氏菌的甘油脱水酶激活因子基因，所述甘油脱水酶激活因子为甘油脱水酶激活因子GdrA和甘油脱水酶激活因子GdrB；S5）向所述受体菌中导入来源于大肠杆菌的醇脱氢酶基因，所述醇脱氢酶是由编码序列是SEQIDNo.8所示的DNA分子编码的蛋白质，或向所述受体菌中导入来源于肺炎克雷伯氏菌的1,3-丙二醇氧化还原酶基因；S6）将所述受体菌中二羟基丙酮合成酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；S7）将所述受体菌中二羟基丙酮激酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；S8）将所述受体菌中磷酸丙糖异构酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；S9）将所述受体菌中果糖二磷酸醛缩酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；S10）将所述受体菌中果糖-1,6-二磷酸酶基因的启动子替换为强启动子PmoxS11）将所述受体菌中转酮酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；多形汉逊酵母中，所述转酮酶的氨基酸序列如NCBI中登录号XP_013934677.1所示，巴斯德毕赤酵母中，所述转酮酶的氨基酸序列如NCBI中登录号XP_002490261.1所示；S12）将所述受体菌中转醛酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；多形汉逊酵母中，所述转醛酶的氨基酸序列如NCBI中登录号XP_013937091.1所示，巴斯德毕赤酵母中，所述转醛酶的氨基酸序列如NCBI中登录号XP_002491849.1所示；S13）将所述受体菌中核糖-5-磷酸异构酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；S14）将所述受体菌中磷酸核酮糖差向异构酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；S15）将所述受体菌中过氧化氢酶基因的启动子替换为强启动子Pmox；S16）将所述受体菌中甲酸脱氢酶基因的启动子替换为弱启动子Ppfk1；所述强启动子Pmox的核苷酸序列为SEQIDNO.10，所述弱启动子Ppfk1的核苷酸序列如NCBI中登录号CP014716.1中第739437至740436位所示。

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