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申请/专利权人:四川农业大学
摘要:本发明公开了一种猕猴桃环斑病毒的多克隆抗体及其制备方法和应用,该猕猴桃环斑病毒的多克隆抗体的制备方法包括:采用原核表达系统,构建AcCRaV‑CP基因的原核表达载体,并通过诱导融合蛋白表达,纯化,重组,得到纯化的重组蛋白,以该重组蛋白制得猕猴桃环斑病毒的多克隆抗体。本发明制得的猕猴桃环斑病毒的多克隆抗体特异性好,效价高达1:1024000,为建立快速、准确、简便、经济的AcCRaV检测技术提供了实验依据。
主权项:1.一种猕猴桃环斑病毒的多克隆抗体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以感染猕猴桃环斑病毒猕猴桃的总RNA制备模板DNA;(2)以步骤(1)制得的模板DNA为模板,采用AcCRaV-BamHI-FXhoI-R引物进行PCR扩增,扩增出AcCRaV-CP目标基因片段;(3)将AcCRaV-CP目标基因片段连接到表达载体上,获得重组载体,然后将重组载体转染大肠杆菌,诱导蛋白表达和纯化,得到重组蛋白;(4)以步骤(3)制得的重组蛋白,制备获得猕猴桃环斑病毒的多克隆抗体;步骤(1)具体过程为:以感染猕猴桃环斑病毒猕猴桃的总RNA为模板,反转录制备cDNA,采用AcCRaV-CP-F-933AcCRaV-CP-R-933引物进行PCR扩增,并对扩增产物进行密码子优化,调整密码子适应指数为0.98,调整GC含量为57%,制得模板DNA;所述模板DNA的序列如SEQIDNO.1所示;所述AcCRaV-CP-F-933序列如SEQIDNO.2所示,所述AcCRaV-CP-R-933序列如SEQIDNO.3所示;步骤(2)中AcCRaV-BamHI-F序列如SEQIDNO.4所示,AcCRaV-XhoI-R序列如SEQIDNO.5所示。
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百度查询: 四川农业大学 一种猕猴桃环斑病毒的多克隆抗体及其制备方法和应用
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