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申请/专利权人：湖南丰晖生物科技有限公司

摘要：本发明涉及一种慢病毒的纯化方法，该纯化方法是在纯化的浓缩过程中使用一定浓度的PEG添加KCl或NaCl按比例与病毒上清进行混合，离心，得到慢病毒沉淀；用PBS溶解，对获得的慢病毒悬液进行核酸酶Benzonase酶切处理；添加鱼精蛋白进行沉淀慢病毒，添加1molLNaCl溶解病毒，离心，得到初纯化的慢病毒悬液；再经过蔗糖密度梯度离心，获得纯化的慢病毒。本发明制得的慢病毒纯化液无外源因子污染，细胞宿主蛋白、宿主DNA残留度低，安全性好，纯度和滴度高，可达到动物实验及临床要求。

主权项：1.一种慢病毒的纯化方法，其特征在于，所述纯化方法包括以下步骤：（1）用PEG与病毒上清进行混合，离心，得到慢病毒沉淀；（2）用PBS溶解沉淀，对获得的慢病毒悬液进行核酸酶酶切处理；（3）添加鱼精蛋白沉淀慢病毒，溶解病毒，离心，得到初纯化的慢病毒悬液；（4）再经过蔗糖密度梯度离心，获得纯化的慢病毒；所述步骤（1）具体为：5XPEG按0.5:1比例与病毒上清进行混合，4℃，沉淀2h，每20min将混合液颠倒混匀；4℃，5000rpm，10min离心病毒混合液，弃上清，得到白色的慢病毒沉淀；所述5XPEG中添加了10-50mL1molLKCl或10-50mL1molLNaCl；所述步骤（2）为：用10mLPBS溶解病毒沉淀，得到病毒溶液；在所述病毒溶液中添加1μL的核酸酶Benzonase酶进行酶切处理；所述步骤（3）具体为：添加1mgmL鱼精蛋白37℃放置30min，10000rpm，4℃，离心10min，得到初纯化的慢病毒沉淀；添加1molLNaCl溶解病毒，得到初纯化的慢病毒悬液；所述步骤（4）具体为：依次在超速离心管底部加入2mL70%，1mL50%，1mL30%，4mL20%蔗糖（wv）浓度梯度溶液，20000rpm，4℃，离心2h；取30%-50%的溶液，每1mL加10mLPBS混匀，得到病毒-蔗糖-PBS混合液；再取新的超速离心管，底部加入6mL20%蔗糖溶液，再加入病毒-蔗糖-PBS混合液，20000rpm，4℃，离心2h，弃掉上清，留下病毒沉淀，用1mL病毒保存液重悬病毒沉淀，4℃冰箱中1-2h溶解病毒沉淀，0.5h混匀一次；10000rpm，10min离心，取上清。

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