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申请/专利权人：上海市农业科学院;上海科立特农科(集团)有限公司

摘要：本发明公开了运用蒸发光散射检测器通过高效液相色谱仪建立灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸成分的分析测定方法。涉及样品提取条件的优化、色谱柱的选择、色谱条件的优化、检测器参数的优化等，同时对建立的方法进行了方法学验证。本发明建立的灵芝孢子粉及其产品中甾醇和脂肪酸成分的HPLC测定方法，应用广泛、方法准确度高、特异性强。

主权项：1.一种灵芝孢子粉及其产品中甾醇类和脂肪酸类成分的HPLC测定方法，其特征在于：1灵芝孢子粉及其产品的预处理步骤：以破壁孢子粉为材料，以乙醇为提取溶剂，按料液比1：10对孢子粉进行超声提取30min，浸提液冷却至室温，摇匀，先经12000rmin离心5min，取上清液，用0.22μm微孔有机相滤膜过滤，即得待测样品溶液；2高效液相色谱检测步骤：采用蒸发光散射检测器，通过高效液相色谱仪对待测样品溶液进行高效液相色谱分析；检测器为蒸发光散射检测器；色谱柱为反相C18色谱柱，流动相溶液成分为乙腈-甲醇-水-异丙醇四相梯度洗脱，其中水中冰醋酸的浓度为0.00％-0.02％；柱温为20-40℃；流速0.8-1.2mlmin；进样体积为5-50μL；3指标成分是甾醇类和脂肪酸类成分：其中甾醇类成分为啤酒甾醇、麦角甾醇过氧化物、麦角甾醇和星鱼甾醇；脂肪酸类成分为油酸、亚油酸、棕榈酸；步骤2高效液相色谱法包括以下步骤：流动相的洗脱程序为：A乙腈+B水+C甲醇+D异丙醇体积比之和＝100％体积：0→10min，ABCD＝400600→ABCD＝600400；10→25min，ABCD＝600400→ABCD＝680320；25→32min，ABCD＝680320→ABCD＝6020200；32→40min，ABCD＝6020200→ABCD＝802000；40→55min，ABCD＝802000→ABCD＝100000；55→65min，ABCD＝100000→ABCD＝100000；65→67min，ABCD＝100000→ABCD＝200080；67→80min，ABCD＝200080→ABCD＝200080；80→82min，ABCD＝200080→ABCD＝400600；82→95min，ABCD＝400600→ABCD＝400600。

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