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申请/专利权人：山东海根生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种甜菊糖苷RB的提纯方法与应用，属于甜菊糖苷RB提纯技术领域。所述提纯包括以下步骤：含RB的甜菊糖苷的提取、絮凝、过滤、吸附、解吸附、脱盐脱色，得到富含甜菊糖苷的物料E；取物料E过柱洗脱，取第8‑10次采集到流出液合并，过滤，干燥，得到物料H；取第6‑7、11‑15次采集到的流出液合并，得到混合液I，吸附，解吸附，得到物料K；取物料H、物料K混合多次重结晶，即得所述高纯度甜菊糖苷RB。

主权项：1.一种甜菊糖苷RB的提纯方法，其特征在于，所述甜菊糖苷RB的提纯方法包括以下步骤：（1）将甜菊叶烘干，粉碎,过筛，得到物料A，备用；（2）取物料A、去离子水、纤维素酶混合，调节混合相pH，置于微波提取装置中进行微波提取，过筛，取液相加入壳聚糖溶液，搅拌，絮凝，过滤，取液相冷却至室温，加入氧化钙、硫酸铝钾，静置，过滤，取液相得到物料B；（3）取D101大孔吸附树脂湿法装柱，泵入所述物料B，吸附，过滤，得到吸附后的树脂；取所述吸附后的树脂湿法装柱，泵入体积分数为70%的乙醇水溶液，解吸附，收集解吸附液，过滤，得到物料C；（4）取LSA-10树脂湿法装柱，泵入所述物料C，收集流出液得到物料D；（5）取DM130大孔吸附树脂湿法装柱，泵入所述物料D，收集流出液得到物料E；（6）取物料E置于甲醇溶液中，加入硅胶，搅拌，水浴蒸干，将蒸干后的物料研磨得到物料F，备用；取硅胶均匀填柱，形成硅胶层；在所述硅胶层顶部均匀填入海砂，形成海砂层；在所述海砂层顶部均匀填入所述物料F，形成物料层；在柱顶均匀覆盖脱脂棉;将用甲醇、去离子水的体积比为9.2-9.5：1配置的洗脱液以1.5-2.5mLmin的速率过柱洗脱，流出液每20mL收集一次，TLC跟踪检测，展开剂为正丁醇、乙酸乙酯与去离子水按照体积比为4∶1∶2组成，固定相为硅胶GF254，显色剂为质量分数10%的硫酸水溶液；取第8-10次采集到流出液合并，得到混合液G，过滤，分离保留物干燥，得到物料H；（7）取第6-7、11-15次采集到的流出液合并，得到混合液I；取LX-T28树脂湿法装柱，泵入所述混合液I进行吸附，吸附后用质量分数为40%的氢氧化钠溶液以1BVh的流速过柱解吸附，收集解吸液，用质量分数为10%的盐酸溶液调节所述解吸液的pH为3，过滤，干燥，得到物料K;（8）将乙醇、纯水按照体积比为9.2-9.5：1的比例混合，得到混合液J，封闭待用;将所述物料H、物料K、混合液J混合，然后将其加热，回流搅拌，于常温静置后进行抽滤，并用混合液J洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到甜菊糖苷RB1，取滤液置于5-10℃静置后，抽滤，并用5-10℃的混合液J洗涤滤饼，收集滤饼并干燥，得到甜菊糖苷RB2，将上述甜菊糖苷RB1、甜菊糖苷RB2合并，即得所述甜菊糖苷RB；其中，所述混合液J的用量为所述物料H和物料K总质量的10-12倍；步骤（2）中，所述物料A、去离子水、纤维素酶、壳聚糖溶液、氧化钙、硫酸铝钾的配量比为1-2g：50-100mL：0.02-0.06g：5-8mL：0.02-0.04g：0.03-0.05g；步骤（6）中，所述物料E、甲醇溶液、第一次加入的硅胶、第二次加入的硅胶、海砂、物料层、脱脂棉、洗脱液、展开剂、固定相、显色剂的配量比为200mL：100-150mL：5-8g：10-20g：10-20g：10-20g：1-2g：100-200mL：10-12mL：3-5g：10-12mL；步骤（2）中，所述微波提取的功率为280-320W、辐射时间为35-45min。

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